【摘 要】
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目的 利用新型模式生物斑马鱼,采用外源性视黄醛脱氢酶2抑制剂--对二乙氨基苯甲醛(4-diethylaminobenzaldehyde,DEAB),建立维甲酸(retinoic acid,RA)缺乏的斑马鱼模型,探讨其
【机 构】
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复旦大学附属儿科医院心血管中心,复旦大学分子医学教育部重点实验室
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目的 利用新型模式生物斑马鱼,采用外源性视黄醛脱氢酶2抑制剂--对二乙氨基苯甲醛(4-diethylaminobenzaldehyde,DEAB),建立维甲酸(retinoic acid,RA)缺乏的斑马鱼模型,探讨其对斑马鱼胚胎心脏发育的影响. 方法 在斑马鱼胚胎受精后5、8、10.3 h,分别用1×10~(-6),5×10~(-6)、10×10~(-6),25×10~(-6) mol/L的DEAB处理,在解剖显微镜下实时观察胚胎发育的全过程,在受精后5 h给予1×10~(-9) mol/L外源性RA干预,观察其对DEAB致畸的拮抗作用.通过胚胎心脏表型观察、心率和心室收缩分数比较以及心脏特异分子标记--心房利钠肽A基因整体原位杂交实验分析RA缺乏对胚胎心脏发育的影响. 结果 外源性DEAB处理后,胚胎生存率随着处理浓度增加而降低,随着处理时间点后移而升高.当DEAB浓度≥5×10~(-6) mol/L时,斑马鱼畸胎率为100%,异常表型一致,并能被1×10~(-9),mol/L外源性RA有效援救.RA缺乏时斑马鱼心脏表现出管状心脏、无向右环化或环化不完全、房室分化异常及房室管区血液反流.与野生型胚胎相比,DEAB处理后斑马鱼胚胎心率和心室收缩分数降低,心房利钠肽A基因表达改变,在心室部位表达清晰强烈,在心房部位表达明显减弱. 结论 DEAB影响胚胎发育有剂量依赖性和时效性,其致畸作用能被外源性RA有效拮抗.RA缺乏影响心脏早期发育的多个重要环节,导致心脏收缩功能受损.心脏心房利钠肽A基因表达受RA信号调控.
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