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【中图分类号】R363【文献标识码】A【文章编号】1632-5281（2015）12
摘要：[目的]研究当归补血汤对动脉粥样硬化大鼠血清MCP-1、IL-1、TNF-α的影响。[方法]将SD大鼠随机分为对照组、模型组、当归补血汤大剂量组、当归补血汤中剂量组、当归补血汤小剂量组，除对照组外，其余四组建立动脉粥样硬化高脂血症模型。对照组与模型组给予生理盐水，其余三组分别给予不同剂量的当归补血汤。造模第14周末取血检测血清MCP-1、IL-1、TNF-α。[结果]与对照组、模型组、当归补血汤小剂量组、中剂量组相比，当归补血汤大剂量组的血清MCP-1、IL-1、TNF-α的变化水平均有显著性差异 （P<0.01），说明大剂量当归补血汤对动脉粥样硬化大鼠治疗前后炎症因子MCP-1、IL-1、TNF-α的变化水平有明显的改善作用。 [结论]当归补血汤具有抑制炎症因子的表达，发挥抗动脉粥样硬化的作用。
关键词：动脉粥样硬化；MCP-1；IL-1；TNF-α；当归补血汤
动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是心脑血管疾病重要的病理基础[1]。众多学者认为，AS的发生发展与慢性炎症密切相关，是各种炎性因子对动脉壁完整性的破坏，诱导动脉壁发生炎症-增殖反应。积极抑制炎症因子的表达，在防治AS中起重要作用。西药对AS的治疗主要有降脂、抗血小板聚集等方法，但其药物具有较大的依赖性、副作用多、易复发等不利因素；相对而言，中医学通过辨证论治，在治疗上具有一定的优势，如整体观念、因人制宜、副作用小等特点。中医基础理论认为气虚血瘀是AS的基本病因病机。本实验研究补气生血之当归补血汤对AS大鼠血清MCP-1、IL-1、TNF-α的影响，探讨当归补血汤在抗AS方面的作用机制，为该方的疗效和临床运用提供科学依据。
1 实验材料
1.1 实验动物 选取健康雄性SD大鼠50只，体重180～200g（贵阳医学院实验动物中心提供）。
1.2 药品试剂 ①维生素D3注射液（江苏吴中医药集团有限公司）。②高脂饲料：2.0%胆固醇、0.3%去氧胆酸钠、7.5%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、5.0%蛋黄粉、85.0%基础饲料。③当归补血汤（贵阳中医二附院制剂室）。④大鼠MCP-1、IL-1、TNF-αELISA检测试剂盒（武汉博士德生物公司）。
1.3检测仪器 台式低速自动平衡离心机（型号：TDZ5-WS），瑞士RAININ移液器，酶标仪 （Molecular Devices） ，高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司），离心管、针头式滤器（武汉博士德生物公司）等。
2实验方法
2.1实验方案 健康SD大鼠50只，适应性喂养1周，随机分为2组：对照组（10只）喂养普通饲料；高脂饲料组（40只）随机分为4组，每组各10只：模型组、当归补血汤小剂量组（当归补血汤煎液1.68g/kg）；当归补血汤中剂量组（当归补血汤煎液8.4g/kg）；当归补血汤大剂量组 （当归补血汤煎液16.8g/kg）。
2.2造模方法 对照组喂普通饲料；高脂饲料组予维生素D3 70万IU/（kg·只）分3天灌胃并喂高脂饲料，五组均予自由饮食，第9周给药组以当归补血汤煎液灌胃；对照组和模型组给予同等体积的生理盐水灌胃，饮食不变，继续给药5周，试验周期共14周。
2.3ELISA酶联免疫吸附法检测血清MCP-1、IL-1、TNF-α14周末禁食12h，股动脉取血3ml/只，置于肝素抗凝真空管中，静置30min，离心5min，取上层血浆，置-20℃冰箱保存待测。ELISA法检测血清MCP-1、IL-1、TNF-α水平，在酶标仪450nm的波长下，测定吸光度（OD）值，通过标准曲线计算血清MCP-1、IL-1、TNF-α的浓度。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
2.4统计方法 使用SPSS 16.0软件，进行单因素方差分析，结果用（ ±s）表示。
3 实验结果 当归补血汤对血清MCP-1、IL-1、TNF-α的影响：当归补血汤大、中剂量组与模型组对比，血清MCP-1、IL-1、TNF-α明显降低，具有统计学意义（P<0.01）。当归补血汤大剂量组与当归补血汤中、小剂量组对比，血清MCP-1、IL-1、TNF-α明显降低，有显著的统计学意义（P<0.01）。当归补血汤小剂量组与模型组对比，在MCP-1、TNF-α没有统计学意义（P>0.05）。见下表：
4 讨论
动脉粥样硬化（AS）的病理演变是一个较缓慢且复杂的过程，研究表明[2]：炎症反应贯穿AS的全过程，炎症因子使内皮细胞间黏附受体发生改变，增加内皮细胞间的通透性，以致白细胞可迁移至内皮下，单核细胞可堆积于血管壁，通过趋化因子向已缺损的血管内皮下迁移，使血管平滑肌细胞凋亡及降解，促进AS的形成和发展。
MCP-1是一种重要的趋化因子，既可促进单核细胞在AS斑块形成中的浸润作用，又能使血管平滑肌细胞增殖，且有诱导单核细胞向内皮细胞粘连和迁移的作用，也可致血栓及新生血管的形成，在AS的形成中起到重要的作用[3]。
IL-1能够刺激内皮细胞产生反应性氧分子，改变血管的通透性，并产生有细胞毒性的脂质过氧化物；能使血管平滑肌细胞增生，也可形成免疫复合物堆积于血管内皮下，促进血栓形成。
TNF-α是一种重要的炎性因子，通过作用于血管内皮细胞改变血管通透性，使抗凝及凝血的平衡系统被打破，最终导致血栓的形成，若在高脂血症中可加速胆固醇透过血管内膜沉积血管内皮下，促使动脉斑块的形成[4]。
动脉粥样硬化的临床表现类似中医学中的“胸痹”、“脉痹”、“中风”等病症。祖国医学认为饮食失节、气血亏虚、瘀血阻络为AS发病的主要病因病机。刘发益等[5]对本病提出血瘀是标、气虚为本；气，可激发、推动血液的生成和运行；气与血是相互资生、相互转化、相互依存的；气虚，则血无以为生；气虚，则推动无力，可致血液停滞，形成瘀血等病理产物。祖国医学中的“气为血之帅”为治疗AS提供了理论依据，治以补气生血、行血，气行则血行，血行则瘀血自去。因此，补气在AS的治疗中起到关键的作用。
当归补血汤为李东垣所创的一首补气生血、祛瘀生新的经典方剂，方中重用黄芪意在补气生血，达到补气生血活血的目的；辅以当归补血活血、益气和营，使阳生阴长，气旺血生。实验结果提示：大、中剂量的当归补血汤对炎症因子MCP-1、IL-1、TNF-α有较明显的降低作用，尤以大剂量当归补血汤对炎症因子的治疗效果最佳；小剂量的当归补血汤对炎症因子MCP-1、TNF-α无明显的调节作用。本实验研究表明，大剂量当归补血汤具有抑制炎症因子的表达、保护动脉血管内膜的作用，从而减缓AS的发生、发展进程。
综上所述，当归补血汤以“补气生血”之功，可抑制免疫炎症因子MCP-1、IL-1、TNF-α的表达，起到保护动脉血管内膜的作用，达到防治AS的目的。本实验表明，补气生血法在AS治疗中的重要性，进一步完善临床应用和丰富了中医疗法，为后续的研究提供了新的实验方法和理论依据。
参考文献
[1] SteinerováA，Racek J，Stozicky F，et al.Antibodies against oxidized LDL theory and clinical use[J].Physiol Ress，2001；50：131-141.
[2] 褚现明，李冰，安毅，等.炎症与动脉粥样硬化关系研究进展[J].中国分子心脏病学杂志，2010，11（3）：184-188.
[3] 官秀梅，钱民章.单核细胞趋化蛋白1对人脐静脉平滑肌细胞增殖的影响[J].中国动脉硬化杂志， 2005， 13（3）： 309 -312.
[4] Li ZJ，Xu G，Fu GSH，et al.Analysis of serum C-reactive protein and in-terleukin-6 in coronary heart disease[J].J Clin Cardio，2003，19 （10）：585-587.
[5]刘发益，文志斌.补阳还五汤抗家兔动脉粥样硬化形成的实验研究.湖南医科大学学报；2010：25（l）：33-35.
作者简介： 林增炜，贵阳中医学院第二附属医院，医师，硕士
通讯作者：周凌云，贵阳中医学院第二附属医院，主任医师，硕士
摘要：[目的]研究当归补血汤对动脉粥样硬化大鼠血清MCP-1、IL-1、TNF-α的影响。[方法]将SD大鼠随机分为对照组、模型组、当归补血汤大剂量组、当归补血汤中剂量组、当归补血汤小剂量组，除对照组外，其余四组建立动脉粥样硬化高脂血症模型。对照组与模型组给予生理盐水，其余三组分别给予不同剂量的当归补血汤。造模第14周末取血检测血清MCP-1、IL-1、TNF-α。[结果]与对照组、模型组、当归补血汤小剂量组、中剂量组相比，当归补血汤大剂量组的血清MCP-1、IL-1、TNF-α的变化水平均有显著性差异 （P<0.01），说明大剂量当归补血汤对动脉粥样硬化大鼠治疗前后炎症因子MCP-1、IL-1、TNF-α的变化水平有明显的改善作用。 [结论]当归补血汤具有抑制炎症因子的表达，发挥抗动脉粥样硬化的作用。
关键词：动脉粥样硬化；MCP-1；IL-1；TNF-α；当归补血汤
动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）是心脑血管疾病重要的病理基础[1]。众多学者认为，AS的发生发展与慢性炎症密切相关，是各种炎性因子对动脉壁完整性的破坏，诱导动脉壁发生炎症-增殖反应。积极抑制炎症因子的表达，在防治AS中起重要作用。西药对AS的治疗主要有降脂、抗血小板聚集等方法，但其药物具有较大的依赖性、副作用多、易复发等不利因素；相对而言，中医学通过辨证论治，在治疗上具有一定的优势，如整体观念、因人制宜、副作用小等特点。中医基础理论认为气虚血瘀是AS的基本病因病机。本实验研究补气生血之当归补血汤对AS大鼠血清MCP-1、IL-1、TNF-α的影响，探讨当归补血汤在抗AS方面的作用机制，为该方的疗效和临床运用提供科学依据。
1 实验材料
1.1 实验动物 选取健康雄性SD大鼠50只，体重180～200g（贵阳医学院实验动物中心提供）。
1.2 药品试剂 ①维生素D3注射液（江苏吴中医药集团有限公司）。②高脂饲料：2.0%胆固醇、0.3%去氧胆酸钠、7.5%猪油、0.2%丙基硫氧嘧啶、5.0%蛋黄粉、85.0%基础饲料。③当归补血汤（贵阳中医二附院制剂室）。④大鼠MCP-1、IL-1、TNF-αELISA检测试剂盒（武汉博士德生物公司）。
1.3检测仪器 台式低速自动平衡离心机（型号：TDZ5-WS），瑞士RAININ移液器，酶标仪 （Molecular Devices） ，高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司），离心管、针头式滤器（武汉博士德生物公司）等。
2实验方法
2.1实验方案 健康SD大鼠50只，适应性喂养1周，随机分为2组：对照组（10只）喂养普通饲料；高脂饲料组（40只）随机分为4组，每组各10只：模型组、当归补血汤小剂量组（当归补血汤煎液1.68g/kg）；当归补血汤中剂量组（当归补血汤煎液8.4g/kg）；当归补血汤大剂量组 （当归补血汤煎液16.8g/kg）。
2.2造模方法 对照组喂普通饲料；高脂饲料组予维生素D3 70万IU/（kg·只）分3天灌胃并喂高脂饲料，五组均予自由饮食，第9周给药组以当归补血汤煎液灌胃；对照组和模型组给予同等体积的生理盐水灌胃，饮食不变，继续给药5周，试验周期共14周。
2.3ELISA酶联免疫吸附法检测血清MCP-1、IL-1、TNF-α14周末禁食12h，股动脉取血3ml/只，置于肝素抗凝真空管中，静置30min，离心5min，取上层血浆，置-20℃冰箱保存待测。ELISA法检测血清MCP-1、IL-1、TNF-α水平，在酶标仪450nm的波长下，测定吸光度（OD）值，通过标准曲线计算血清MCP-1、IL-1、TNF-α的浓度。操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
2.4统计方法 使用SPSS 16.0软件，进行单因素方差分析，结果用（ ±s）表示。
3 实验结果 当归补血汤对血清MCP-1、IL-1、TNF-α的影响：当归补血汤大、中剂量组与模型组对比，血清MCP-1、IL-1、TNF-α明显降低，具有统计学意义（P<0.01）。当归补血汤大剂量组与当归补血汤中、小剂量组对比，血清MCP-1、IL-1、TNF-α明显降低，有显著的统计学意义（P<0.01）。当归补血汤小剂量组与模型组对比，在MCP-1、TNF-α没有统计学意义（P>0.05）。见下表：
4 讨论
动脉粥样硬化（AS）的病理演变是一个较缓慢且复杂的过程，研究表明[2]：炎症反应贯穿AS的全过程，炎症因子使内皮细胞间黏附受体发生改变，增加内皮细胞间的通透性，以致白细胞可迁移至内皮下，单核细胞可堆积于血管壁，通过趋化因子向已缺损的血管内皮下迁移，使血管平滑肌细胞凋亡及降解，促进AS的形成和发展。
MCP-1是一种重要的趋化因子，既可促进单核细胞在AS斑块形成中的浸润作用，又能使血管平滑肌细胞增殖，且有诱导单核细胞向内皮细胞粘连和迁移的作用，也可致血栓及新生血管的形成，在AS的形成中起到重要的作用[3]。
IL-1能够刺激内皮细胞产生反应性氧分子，改变血管的通透性，并产生有细胞毒性的脂质过氧化物；能使血管平滑肌细胞增生，也可形成免疫复合物堆积于血管内皮下，促进血栓形成。
TNF-α是一种重要的炎性因子，通过作用于血管内皮细胞改变血管通透性，使抗凝及凝血的平衡系统被打破，最终导致血栓的形成，若在高脂血症中可加速胆固醇透过血管内膜沉积血管内皮下，促使动脉斑块的形成[4]。
动脉粥样硬化的临床表现类似中医学中的“胸痹”、“脉痹”、“中风”等病症。祖国医学认为饮食失节、气血亏虚、瘀血阻络为AS发病的主要病因病机。刘发益等[5]对本病提出血瘀是标、气虚为本；气，可激发、推动血液的生成和运行；气与血是相互资生、相互转化、相互依存的；气虚，则血无以为生；气虚，则推动无力，可致血液停滞，形成瘀血等病理产物。祖国医学中的“气为血之帅”为治疗AS提供了理论依据，治以补气生血、行血，气行则血行，血行则瘀血自去。因此，补气在AS的治疗中起到关键的作用。
当归补血汤为李东垣所创的一首补气生血、祛瘀生新的经典方剂，方中重用黄芪意在补气生血，达到补气生血活血的目的；辅以当归补血活血、益气和营，使阳生阴长，气旺血生。实验结果提示：大、中剂量的当归补血汤对炎症因子MCP-1、IL-1、TNF-α有较明显的降低作用，尤以大剂量当归补血汤对炎症因子的治疗效果最佳；小剂量的当归补血汤对炎症因子MCP-1、TNF-α无明显的调节作用。本实验研究表明，大剂量当归补血汤具有抑制炎症因子的表达、保护动脉血管内膜的作用，从而减缓AS的发生、发展进程。
综上所述，当归补血汤以“补气生血”之功，可抑制免疫炎症因子MCP-1、IL-1、TNF-α的表达，起到保护动脉血管内膜的作用，达到防治AS的目的。本实验表明，补气生血法在AS治疗中的重要性，进一步完善临床应用和丰富了中医疗法，为后续的研究提供了新的实验方法和理论依据。
参考文献
[1] SteinerováA，Racek J，Stozicky F，et al.Antibodies against oxidized LDL theory and clinical use[J].Physiol Ress，2001；50：131-141.
[2] 褚现明，李冰，安毅，等.炎症与动脉粥样硬化关系研究进展[J].中国分子心脏病学杂志，2010，11（3）：184-188.
[3] 官秀梅，钱民章.单核细胞趋化蛋白1对人脐静脉平滑肌细胞增殖的影响[J].中国动脉硬化杂志， 2005， 13（3）： 309 -312.
[4] Li ZJ，Xu G，Fu GSH，et al.Analysis of serum C-reactive protein and in-terleukin-6 in coronary heart disease[J].J Clin Cardio，2003，19 （10）：585-587.
[5]刘发益，文志斌.补阳还五汤抗家兔动脉粥样硬化形成的实验研究.湖南医科大学学报；2010：25（l）：33-35.
作者简介： 林增炜，贵阳中医学院第二附属医院，医师，硕士
通讯作者：周凌云，贵阳中医学院第二附属医院，主任医师，硕士