具核梭杆菌外膜囊泡蛋白组分和抗原性分析及对宿主细胞毒性研究

来源 :中国病原生物学杂志 | 被引量 : 1次 | 上传用户:reeyung
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目的 研究具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)外膜囊泡(Outer membrane vesicle, OMV)蛋白质组学特征及其对宿主细胞的毒性作用。方法 使用梯度离心法从Fn的培养上清液中分离纯化出OMV (Fn-OMV),通过中文名称(Nano-LC/MS/MS)分析鉴定Fn-OMV携带的蛋白质;利用GO数据库进行分类,并通过KEGG注释通路进行分类和分析。通过流式细胞术检测Fn-OMV处理人白血病T细胞Jurkat细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7后细胞凋亡的情况,同时使用Fn活菌作为对照;通过细胞增殖毒性实验(CCK8)探究Fn-OMV对人结肠癌RKO细胞增殖的影响。结果 通过革兰染色观察确定Fn形态,粒径分析所提取的Fn-OMV平均大小为126.5 nm,质量良好。Nano-LC/MS/MS结果表明Fn-OMV共携带509个蛋白,占Fn全菌蛋白的25%,其中主要的细菌外膜蛋白有10个,均具有良好的抗原性和多个抗原决定簇。通过GO分类发现Fn-OMV携带大量分子功能相关蛋白,经KEGG注释通路分析包含蛋白数目最多的前10个通路为:抗生素合成,碳代谢,核糖体,氨基酸合成,嘌呤代谢,氨酰tRNA合成,丁酸盐代谢,糖酵解/糖异生,丙酮酸代谢,氨基酸和核苷酸糖代谢。流式细胞术结果表明Fn活菌可促进Jurkat细胞和RAW264.7细胞凋亡,但Fn-OMV对二者凋亡无显著作用。Fn-OMV对RKO细胞的增殖无显著作用。结论 Fn-OMV携带的细菌外膜蛋白有10个,均具有良好的抗原性和多个抗原决定簇,与Fn相比,其对细胞凋亡和增殖无显著作用。因此,本研究对基于OMV的Fn疫苗设计提供了基础信息,具有潜在的应用价值。
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