【摘 要】
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目的 构建甲型H5N1禽流行性感冒流感病毒血凝素(HA)抗原和霍乱毒素B亚单位(CTB)融合蛋白真核表达载体,并研究其在COS7细胞中的表达特性,及其在动物体内不同时间点诱导机体产生特异性抗体的情况.方法 采用PCR技术分别克隆CTB基因和HA基因,并用BamH Ⅰ酶切2个基因片段,在T4连接酶的作用下构建CT-HA融合基因(CH基因).双酶切后,将CH基因插入真核表达质粒pCI-neo中,构建甲
【机 构】
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430030武汉市疾病预防控制中心健康教育所,华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系,华中科技大学同济医学院基础医学院病原生物学系,武汉市东西湖区人民医院妇产科,武汉市皮肤病防治所,华中科技大学
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目的 构建甲型H5N1禽流行性感冒流感病毒血凝素(HA)抗原和霍乱毒素B亚单位(CTB)融合蛋白真核表达载体,并研究其在COS7细胞中的表达特性,及其在动物体内不同时间点诱导机体产生特异性抗体的情况.方法 采用PCR技术分别克隆CTB基因和HA基因,并用BamH Ⅰ酶切2个基因片段,在T4连接酶的作用下构建CT-HA融合基因(CH基因).双酶切后,将CH基因插入真核表达质粒pCI-neo中,构建甲型H5N1禽流感病毒融合蛋白真核表达载体(pCI-CH).将pCI-CH质粒转染COS7细胞,利用Western印迹、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测HA抗原的表达；间接ELISA法检测免疫接种新西兰大白兔后其血清中HA抗原的特异性抗体效价,以及与H1N1、H9N1、H3N2和乙型流感病毒的交叉反应情况.结果 pCI-CH真核表达载体(即核酸疫苗)构建成功,可在COS7细胞中高效表达,并能在大白兔体内诱导产生特异性抗pCI-CH抗体.核酸疫苗pCI-CH特异性抗血清不仅可以与甲型H5N1流感病毒特异性结合(P/N＞2.1),而且可以与H1N1、H9N1和H3N2毒株发生特异性反应；但该抗血清与乙型流感病毒无特异性反应.结论 构建的甲型H5N1禽流感病毒核酸疫苗具有良好的免疫原性。
其他文献
目的 探讨内镜下逆行胰胆管造影(ERCP)在成人胆道蛔虫病诊断、治疗中的临床应用.方法 回顾性分析沈阳军区总医院内镜科2005年1月至2012年12月收治的19例经ERCP诊断、治疗的成人胆道蛔虫病患者的临床资料.结果 胆道蛔虫病患者共19例.其中男11例,女8例；平均年龄(62.7±10.8)岁.居住于农村8例,城乡结合部7例,城镇4例；全部病例均有生食蔬菜、瓜果习惯.19例患者中发现活体蛔虫9
既往检测HBsAg主要用于临床诊断,近年来的研究表明,HBsAg定量水平可作为其血清转换的预测和治疗终点的评估,尤其是在应用干扰素治疗HBeAg阴性慢性乙型肝炎(CHB)患者时,较低的HBsAg基线水平和治疗后显著的下降,预示患者治疗效果较好[1-2].据此,一些学者建议将HBsAg定量检测纳入抗HBV治疗的检测体系中,以更好地评价抗病毒治疗尤其是干扰素治疗的效果.但是,由于HBsAg的水平受到诸
例1 男,49岁.发现HBsAg阳性20年,腹胀、纳差、尿黄20 d.20年前患者因乏力查肝功能异常(数值不详),HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+).经保肝治疗后转氨酶恢复正常,后未再复查.20 d前患者无明显诱因出现腹胀、纳差、尿黄,当地医院查血ALT 964 U/L、AST 870 U/L、TBil 173.4μmol/L、DBil 116.2μmol/L,HBsAg(+)、
目的 探讨检测血清与胸腔积液中瘦素(LEP)、TNF-α、癌胚抗原(CEA)、C-反应蛋白(CRP)和IL-6在鉴别诊断结核病与恶性肿瘤中的价值.方法 抽取54例肺癌患者及41例结核患者胸腔积液与血清,采用ELISA和免疫比浊法分别检测胸腔积液和血清中LEP、TNF-α、CEA、CRP和IL-6含量,正态分布数据采用t检验,非正态分布数据采用秩和检验.结果 结核患者和肿瘤患者血清中LEP分别为(0
随着现代科技的进步和抗结核药物的合理、规范使用,以及世界卫生组织推荐的直接督导下短程化学治疗,曾作为呼吸系统常见的结核病发病率和病死率曾明显降低.近年来,由于人口流动频繁、贫富差距加大,及AIDS、器官移植、恶性肿瘤和糖尿病患者的增多,结核病的发病率又呈现上升趋势,且痰结核分枝杆菌阴性的不典型肺结核病例数也不断增加,导致临床误诊、误治现象时有发生[1].本研究分析胸部CT表现为间质性肺疾病(ILD
中华医学会热带病与寄生虫学分会主办的全国新发和再发传染病学术研讨会定于2012年6月在郑州市召开。会议将邀请国内外著名专家对全国新发和再发传染病的基础研究和临床诊治进展等专题进行报告，欢迎各位医生踊跃投稿参加。
习近平总书记在庆祝中国共产党成立100周年大会上强调，要“继续推进新时代党的建设新的伟大工程，不断严密党的组织体系”。踏上新的赶考之路，必须认真贯彻习近平总书记“七一”重要讲话精神，切实加强基层党组织建设和党员队伍建设，着力完善上下贯通、执行有力的组织体系，为奋力实现第二个百年奋斗目标提供坚强组织保证。 一、弘扬伟大建党精神，在举旗铸魂中笃定前行 习近平总书记在“七一”重要讲话中首次系统、鲜明
患儿男,11岁.因发热、皮疹5d,下肢无力3d入院.患儿入院前5d无明显诱因出现持续发热,体温最高39.4℃,伴轻度肢体抖动,无畏寒、寒战,无惊厥、抽搐,自服扑热息痛后体温可降至正常,随后又迅速上升,同时发现患儿自耳后开始出现充血性斑丘疹及疱疹,迅速发展至颜面、颈部以及躯干四肢,外生殖器可见散在疱疹,部分破溃,脓苔附着,伴有轻度瘙痒,疱疹分批出现,伴有恶心,未呕吐,入院前3d患儿突然出现全身乏力,
目的 验证已建立的肝硬化预测模型——铜蓝蛋白(CP)模型,评价其对肝硬化的诊断价值.方法 收集2011年7月至2013年2月福建医科大学附属第一医院肝病中心确诊的慢性乙型肝炎(CHB)患者155例,作为验证组,同步进行肝活组织病理学、CP及生物化学指标检查.对前期由148例CHB患者构建的CP模型(模型组)进行内部验证,并与aspartate aminotransferase/ platelet
约30％的CD4-T淋巴细胞计数＜100/μL的AIDS患者合并CMV血症[1].AIDS患者合并CMV感染可出现多种CMV终末器官疾病(endorgan disease,EOD),如视网膜炎、结肠炎、食管炎以及CMV相关神经病变,其中视网膜炎最常见[2].国内学者对AIDS人群CMV视网膜炎已有较多的描述,其常见于CD4-T淋巴细胞计数＜50/μL的患者,严重时可导致失明,对更昔洛韦治疗反应良好