【摘 要】
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为了准确可靠地对肉制品中猪源性成分进行定量检测,通过生物信息学方法筛选到猪细胞核单拷贝基因(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 2-like,CACA).以CACA基因为扩增靶标,设计了特异性引物、TaqMan探针,建立了基于实时荧光定量PCR技术检测猪肉含量的方法.实验结果表明,该方法具有良好的种外特异性和种内稳定性,在20～0.032 ng/μL的DNA浓度范围内,模板DNA和扩增Ct值之间存在良好的线性关系,标准曲线为y=?
【机 构】
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中南民族大学生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室,湖北武汉 430074
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为了准确可靠地对肉制品中猪源性成分进行定量检测,通过生物信息学方法筛选到猪细胞核单拷贝基因(carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 2-like,CACA).以CACA基因为扩增靶标,设计了特异性引物、TaqMan探针,建立了基于实时荧光定量PCR技术检测猪肉含量的方法.实验结果表明,该方法具有良好的种外特异性和种内稳定性,在20～0.032 ng/μL的DNA浓度范围内,模板DNA和扩增Ct值之间存在良好的线性关系,标准曲线为y=?3.508x+28.636,线性决定系数R2为0.997.在相对标准偏差≤25％的条件下,可准确检测猪DNA含量低至0.1％的DNA样品,猪肉含量低至5.0％的肉制品.通过对市售样品的检测,发现有的肉制品中掺有猪肉但未标识,有的配料表中猪肉并非主要成分但实际上猪肉占主要成分.本研究建立的实时荧光定量PCR能够准确可靠对肉制品中的猪肉成分进行检测,对准确鉴别肉制品掺假以及量化肉制品组分具有重要参考价值.
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