【摘 要】
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目的了解癌基因c-myc分子中各个区域的作用,找出最佳的反义封闭靶区,为c-myc表达增高相关疾病的基因治疗提供依据.方法系统地构建了人类3种反义c-myc重组逆转录病毒表达载体(
【机 构】
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第一军医大学组胚教研室,广东,广州,510515
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目的了解癌基因c-myc分子中各个区域的作用,找出最佳的反义封闭靶区,为c-myc表达增高相关疾病的基因治疗提供依据.方法系统地构建了人类3种反义c-myc重组逆转录病毒表达载体(aM1、aM2和aM3),分别载有c-myc第1、2和3外显子的反义片段,经脂质体转染大鼠主动脉平滑肌细胞,并于转染后48 h采用流式细胞仪对细胞进行瞬时表达检测.结果与对照组相比,aM2使c-myc表达量减少了37.6%,aM1为对照组的98.8%,而aM3却使c-myc表达增高21.7%;与此同时,aM1和aM2组增殖细胞核抗原(PCNA)表达分别下降了36.0%和30.9%,而aM3组PCNA表达增高.DNA分析则表明3种载体均使处于G0/G1期的细胞比例略为增高(aM2>aM1>aM3),S 期比例略下降(aM1>aM2>aM3),但尚未有DNA合成量的明显改变.结论反义基因的导入在瞬时表达时可影响细胞中靶蛋白及其他生长相关蛋白的表达,但对细胞周期和DNA合成的影响尚小.
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