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目的：考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法：以哈蟆油为原料，采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白，先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解，根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布，应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解的最佳条件。结果：最佳酶解条件为胃蛋白酶与底物比（m／m）1：2000、酶解时间2h、碱性蛋白酶与底物比（m／m）1：100、酶解时间6h，酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量小于5000所占的比例为94．85％，哈蟆油蛋白中蛋白质含量为49．85％。结论：胃蛋白酶与碱性蛋白酶结合使用可以有效地