关键词：东北点地梅;槲皮素;山柰素;高效液相色谱法
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2018.10.019
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2018）10-0088-03
Content Determination of Quercetinum and Kaempferol in Androsace Filiformis Retz. in Different Producing Areas in Inner Mongolia
Qiherima， CHENG Ri-qing， NA Sheng-sang， Buren， Tana， GAO Jing， Sarengaowa
Inner Mongolia Medical University， Huhhot 010110， China
Abstract： Objective To determine the contents of quercetinum and kaempferol in Androsace filiformis Retz. in different producing areas in Inner Mongolia; To provide references for establishing quality standards of Androsace filiformis Retz. Methods HPLC was performed on the column of COSMOSIL 5C18-MS-II （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） with mobile phase of acetonitrile - 0.5% phosphonic acid solution （40：60） at a flow rate of 0.8 mL/min; the detection wavelength was 360 nm; column temperature was 30 ℃. Results The contents of quercetinum in Androsace filiformis Retz. from 5 different producing areas were from 3.58 mg/g to 10.51 mg/g， the average content was 7.14 mg/g， and the contents of kaempferol were from 6.28 mg/g to 9.57 mg/g， the average content was 8.15 mg/g. Conclusion The method in this study is simple and accurate， with good reproducibility， and can be used for the simultaneous determination of quercetinum and kaempferol in Androsace filiformis Retz.， which can provide a basis for the establishment of quality standards for of Androsace filiformis Retz. in Inner Mongolia.
Keywords： Androsace filiformis Retz.; guercetinum; kaempferol; HPLC
点地梅属植物Androsace是报春花科的一个中等大属，我国约有70多种。点地梅是蒙医常用药，蒙药名为“达兰-套布其”，惯用品种为东北点地梅Androsace filiformis Retz.和北点地梅Androsace septentrionalis L.，在《无误蒙药鉴》《四部甘露》等蒙医药典籍中均有记载。蒙药点地梅具有清热、解毒、消肿、疗伤、祛协日乌素、滋养强壮功效，主治创伤化脓疼痛、肿毒性关节炎、协日乌素症、赫依协日乌素合并症[1]。
点地梅中主要含有黄酮类和三萜皂苷类成分，其中黄酮类成分主要为槲皮素和山柰素[2-4]。槲皮素具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤等生物活性和广泛的药理作用[5]，山柰素具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、防癌、抗癌等多种功效[6]，两者均为点地梅的有效成分。
点地梅为蒙医习用药材，但迄今尚无该药质量标准，因此限制了其在蒙医药领域的合理利用。本研究对内蒙5个不同产地东北点地梅样品中的槲皮素和山柰素进行含量分析，为蒙药点地梅质量标准的建立提供依据。
1 仪器与试药
Dionex UltiMate 3000液相色谱仪（美国Thermo- Fisher公司），BSC电子分析天平（德国塞多利斯科学仪器有限公司），HH-4数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）。
槲皮素对照品（批号100081-200907）、山柰素对照品（批号110861-200606），供含量测定用，中国食品药品检定研究院;乙腈（色谱纯，Fisher公司），水为市售娃哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯。5批东北点地梅样品分别采自内蒙古不同地区，经内蒙古医科大学药学院生药学教研室渠弼副教授鉴定为报春花科点地梅属植物东北点地梅Androsace filiformis Retz.的干燥全草，样品来源信息见表1。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.5%磷酸（40∶60），流速0.8 mL/min，检测波长360 nm，柱温30 ℃，进样量10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素和山柰素对照品适量，分别加甲醇制成每1 mL含0.3 mg槲皮素和0.3 mg山柰素的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末约0.5 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入甲醇-25%盐酸（体积比为4∶1）混合溶液25 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用上述混合溶液补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液[7]。
2.4 系统适用性试验
取上述对照品溶液和供试品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。结果表明，理论板数以各待测成分峰计均高于10 000，各成分基线分离良好。
2.5 线性关系考察
分别取上述槲皮素和山柰素对照品溶液，进样量分别为1、2、4、8、12、16 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以峰面积对质量进行线性回归。槲皮素回归方程为Y=73.81 5X-0.550 9，r2=0.999 9;山柰素回归方程为Y=76.565 9X+0.215 1，r2=1.000 0，表明槲皮素和山柰素在0.3～4.8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
取本品供试品溶液1份，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，结果槲皮素和山柰素峰面积的RSD分别为0.18%和0.51%，表明仪器精密度良好。
2.7 重复性试验
取6份同一批样品约0.5 g，精密称定，分别按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，结果槲皮素和山柰素峰面积的RSD分别为2.81%和3.60%，表明本法重复性良好。
2.8 稳定性试验
取同一份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10、12 h进样测定峰面积，槲皮素和山柰素峰面积的RSD分别为0.59%和0.60%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.9 加样回收率试验
取6份已知槲皮素和山柰素含量的样品粉末，每份约0.25 g，精密称定，以2份为1组，分别按对照品加入量与供试品中待测成分量之比为0.5∶1、1∶1、1.5∶1同时加入槲皮素和山柰素对照品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液并测定峰面积，计算加样回收率，结果见表2。槲皮素加样回收率为98.23%～104.77%，平均101.91%，RSD=2.51%;山柰素加样回收率为95.48%～105.12%，平均100.97%，RSD=3.55%。表明本法回收率良好。
2.10 样品含量测定
取5批东北点地梅样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项下色谱条件进行含量测定，结果见表3。东北点地梅样品中槲皮素含量为3.58～10.51 mg/g，山柰素含量为6.28～9.57 mg/g，平均含量分别为7.14 mg/g和8.15 mg/g。
3 讨论
本研究在选择样品提取方法时，首先比较了超声提取法和回流提取法，结果回流提取法提取相对完全、重复性好;其次比较了先甲醇回流后加盐酸水解方法与同时加入甲醇和盐酸的提取效果，结果后者提取率更高，方法学更稳定。故本试验确定采用文中所述的提取方法。
5个产地东北点地梅中槲皮素和山柰素的含量分别为3.58～10.51 mg/g和6.28～9.57 mg/g，平均含量分别为7.14 mg/g和8.15 mg/g，其中样品1（乌兰察布苏木山）中2种成分的含量均较高，样品4（兴安盟五岔沟）中的含量均最低，且2个产地样品中槲皮素含量相差较大，说明不同产地东北点地梅品质有较大差别。
本研究建立的测定方法简便、准确、重复性好，可用来同时测定东北点地梅中槲皮素和山柰素的含量。试验结果表明，5个产地东北点地梅中槲皮素和山柰素的含量均较高，可作为蒙药点地梅质量评价和控制的指标成分。
参考文献：
[1] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：蒙药卷[M].上海：上海科学技术出版社，2004：300.
[2] 郭龙，巩江，倪士峰，等.藏药点地梅属药学研究进展[J].安徽农业科学，2010，38（13）：6706，6726.
[3] 李承花，殷志琦，黃晓君，等.点地梅的化学成分[J].中国天然药物， 2008，6（8）：123-125.
[4] 何希瑞，魏桂芳，姚宏，等.点地梅属植物化学成分与药理活性研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（11）：296-299.
[5] 舒毅，谭陶，张思宇，等.槲皮素的药理学研究进展[J].华西药学杂志， 2008，23（6）：689-691.
[6] 陈育华，周克元，袁汉尧，等.山柰酚药效的研究进展[J].广东医学， 2010，31（8）：1064-1066.
[7] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：214.