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研究了米曲霉发酵鸡血血红蛋白（Hb）制备小分子肽的优化工艺条件,并测定了多肽分子质量的分布。在单因素实验基础上选出影响Hb多肽得率最主要的因素,并以多肽得率作为响应值,应用响应面法优化发酵工艺;通过凝胶色谱方法检测Hb多肽分子的分布范围。结果表明,接种量、培养温度、起始pH值和装液量为影响Hb得率最主要的因素,其优化工艺为接种量7.9%,培养温度30.2℃,起始pH值7.01,装液量61 mL,Hb多肽得率由最初的1.85 mg/mL提高到2.18mg/mL;采用HPLC凝胶色谱法测定Hb多肽分子质量,其