【摘 要】
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为建立适用于小麦小花细胞核的分离及其蛋白质双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)体系,以小麦品种西农1376三核期小花为供试材料,采用叶绿素含量测定、荧光显微
【机 构】
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长江大学农学院/湖北省涝渍灾害与湿地农业重点实验室,湖北荆州,434025长江大学农学院/湖北省涝渍灾害与湿地农业重点实验室,湖北荆州434025;中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京100101;
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为建立适用于小麦小花细胞核的分离及其蛋白质双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)体系,以小麦品种西农1376三核期小花为供试材料,采用叶绿素含量测定、荧光显微镜观察和组蛋白免疫印迹检测等方法对分离和富集到的细胞核进行了纯度评价,并在SDS-PAGE胶浓度和蛋白质上样量等方面对细胞核蛋白质双向电泳体系进行了探索和优化,确立了一套适用于小麦小花细胞核的分离及其蛋白质双向电泳的技术方法.结果表明,获得的细胞核完整且纯度较高;经TCA/丙酮法提取其蛋白质,采用17 cm、pH 4～7 IPG胶条和12％ SDS-PAGE分离胶,上样量为230 μg的双向电泳体系,更适合于小麦小花细胞核蛋白质组分离,经PDQuest 2DE 8.0.1软件统计分析,可在2-DE图谱上分辨出约264个蛋白点,蛋白点清晰呈圆形,无横条纹干扰.
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