探讨血管内皮生长因子(VEGF)诱导对人翼状胬肉成纤维细胞血管生成拟态(VM)的影响。
方法收集在广州市增城区人民医院行翼状胬肉手术的6例新鲜的初发性人翼状胬肉标本(年龄41～58岁)。将人翼状胬肉新鲜组织剪碎后进行体外贴壁细胞常规培养，并采用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色和广谱细胞角蛋白(CK)染色对人翼状胬肉成纤维细胞进行鉴定。分别设置对照组和不同浓度的VEGF(1 ng/ml、10 ng/ml及100 ng/ml)组，取生长良好的3～5代翼状胬肉成纤维细胞进行分组培养。采用细胞计数试剂盒－8法检测各组成纤维细胞的增殖能力。应用细胞三维培养技术和糖原染色法观察各组VM的进展情况，采用蛋白质印迹法检测各组细胞的基质金属蛋白酶(MMP)－2和低氧诱导因子－1α(HIF－1α)蛋白的表达。各组吸光度(OD值)、MMP－2及HIF－1α的描述均采用均数±标准差(
±s)表示，对照组与不同浓度VEGF组的比较采用单向方差分析，当差异有统计学意义时，进一步两两比较。双变量相关性分析采用Spearman′s等级相关分析。
人翼状胬肉成纤维细胞鉴定结果显示，细胞爬片经苏木精－伊红染色后，在显示镜下细胞呈长梭形、三角形、扇形或不规则状。细胞免疫化学染色结果显示，细胞的胞浆呈Vimentin阳性表达，广谱CK阴性表达。细胞计数试剂盒－8法检测细胞增殖结果显示，对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的OD值分别为0.57±0.023、0.59±0.012、0.77±0.024及1.014±0.035。对照组和1 ng/ml组比较差异无统计学意义(t＝1.21，P>0.05)；10 ng/ml组和100 ng/ml组的OD值均明显高于对照组和1 ng/ml组(t＝14.78，12.34；P<0.05)；100 ng/ml组的OD值最高，与对照组、1 ng/ml组及10 ng/ml组比较，差异有统计学意义(t＝20.12，19.45，13.41；P<0.05)。细胞三维培养及糖染色显示，10 ng/ml组和100 ng/ml组均出现VM结构，而对照组和1 ng/ml组未发现VM结构。10 ng/ml组和100 ng/ml组VM结构的密度分别为4.40±1.14和12.40±2.07，差异有统计学意义(t＝－7.899，P<0.05)。对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的MMP－2值分别为0.26±0.038、0.29±0.013、0.39±0.013及0.73±0.014；对照组、1 ng/ml组、10 ng/ml组及100 ng/ml组细胞的HIF－1α值分别为0.087±0.0086、0.087±0.0031、0.15±0.0016及0.37±0.026。对照组和1 ng/ml组中MMP－2和HIF－1α灰度值的差异均无统计学意义(t＝1.21，0.01；P>0.05)；10 ng/ml组中MMP－2和HIF－1α灰度值均显著高于对照组和1 ng/ml组(t＝7.92，6.85，17.64，17.82；P<0.05)；100 ng/ml组的中MMP－2和HIF－1α灰度值均显著高于其他3组(t＝28.48，26.45，18.72，25.31，24.78，15.45；P<0.05)。翼状胬肉成纤维细胞的血管生成拟态密度与MMP－2和HIF－1α表达呈显著正相关(r＝0.509，0.503；P<0.05)。
结论VEGF能够增强人翼状胬肉成纤维细胞的增殖能力、促进VM出现及促使MMP－2和HIF－1α表达增高。提示VEGF因素可能是翼状胬肉出现VM的分子机制，并协同增强MMP－2和HIF－1α表达一起影响翼状胬肉的进展。