【摘 要】
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目的 观察牙周炎患者及牙周健康者颌骨骨髓间充质干细胞(orofacial bone marrow mesenchymal stem cells,OBMSCs)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及成骨因子表达变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路对OBMSCs成骨分化的影响.方法 取3例中期牙周炎患者和3例牙周健康者正颌手术磨除的颁骨碎片,分离、提取OBMSCs,采用流式细胞术检测CD90、CD105、CD34、CD45阳性表达.取牙周健康者OBMSCs分为健康对照组、健
【机 构】
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郑州大学附属郑州中心医院口腔科,河南郑州 450007
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目的 观察牙周炎患者及牙周健康者颌骨骨髓间充质干细胞(orofacial bone marrow mesenchymal stem cells,OBMSCs)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及成骨因子表达变化,探讨Wnt/β-catenin信号通路对OBMSCs成骨分化的影响.方法 取3例中期牙周炎患者和3例牙周健康者正颌手术磨除的颁骨碎片,分离、提取OBMSCs,采用流式细胞术检测CD90、CD105、CD34、CD45阳性表达.取牙周健康者OBMSCs分为健康对照组、健康DKK1组、健康agonist 1组,取牙周炎患者OBMSCs分为牙周炎对照组、牙周炎DKK1组、牙周炎agonist 1组,健康DKK1组、牙周炎DKK1组加入20 μmol/L Wnt/β-catenin信号通路抑制剂DKK1,健康agonist 1组、牙周炎agonist 1组加入20 μmol/L Wnt/β-catenin信号通路激动剂Wnt agonist 1,健康对照组、牙周炎对照组不作处理.6组OBMSCs长至80％左右,加入成骨诱导液培养21d,采用茜素红染色法观察矿化结节数;药物处理48 h后,采用ELISA法检测ALP活性的光密度值,采用Western blot法检测成骨细胞因子RUNX2、ALP、COL1A、β-catenin蛋白相对表达量.结果 牙周炎患者与牙周健康者OBMSCs CD90和CD105呈阳性表达,CD34和CD45呈阴性表达,符合间充质干细胞的表面抗原特征.牙周炎agonist 1组矿化结节数量[(29.17±3.16)个]多于牙周炎对照组[(14.18±1.12)个]、牙周炎DKK1组[(3.29±0.79)个](P＜0.05),牙周炎对照组多于牙周炎DKK1组(P＜0.05);健康agonist 1组矿化结节数量[(44.17±4.62)个]多于健康对照组[(21.32±2.63)个]、健康DKK1组[(9.01±1.16)个](P＜0.05),健康对照组多于健康DKK1组(P＜0.05);牙周炎对照组矿化结节数量少于健康对照组(P＜0.05),牙周炎DKK1组少于健康DKK1组(P＜0.05),牙周炎agonist 1组少于健康agonist 1组(P＜0.05).牙周炎agonist 1组ALP活性的光密度值(0.57±0.06)高于牙周炎对照组(0.25±0.02)、牙周炎DKK1组(0.08±0.01) (P＜0.05),牙周炎对照组高于牙周炎DKK1组(P＜0.05);健康agonist 1组ALP活性的光密度值(0.87±0.08)高于健康对照组(0.37±0.03)、健康DKK1组(0.15±0.01) (P＜0.05),健康对照组高于健康DKK1组(P＜0.05);牙周炎对照组ALP活性的光密度值低于健康对照组(P＜0.05),牙周炎DKK1组低于健康DKK1组(P＜0.05),牙周炎agonist 1组低于健康agonist 1组(P＜0.05).牙周炎agonist 1组RUNX2(0.63±0.03)、ALP(0.65±0.03)、COL1A(0.65±0.04)、β-catenin(0.61±0.10)蛋白相对表达量均高于牙周炎对照组(0.32±0.07、0.41±0.03、0.23±0.03、0.56±0.02)、牙周炎DKK1组(0.10±0.04、0.15±0.03、0.10±0.03、0.24±0.10)(P＜0.05),牙周炎对照组均高于牙周炎DKK1组(P＜0.05);健康agonist 1组RUNX2(1.49±0.02)、ALP(1.54±0.03)、COL1A(1.23±0.02)、β-catenin(0.95±0.01)蛋白相对表达量均高于健康对照组(1.01±0.08、0.90±0.02、0.79±0.02、0.59±0.08)、健康DKK1组(0.13±0.02、0.23±0.04、0.11±0.01、0.11±0.01)(P＜0.05),健康对照组均高于健康DKK1组(P＜0.05);健康对照组、健康DKK1组、健康agonist 1组RUNX2、ALP、COL1A、β-catenin蛋白相对表达量分别高于牙周炎对照组、牙周炎DKK1组、牙周炎agonist 1组(P＜0.05).结论 Wnt/β-catenin信号通路调控OBMSCs中ALP活性及成骨因子RUNX2、ALP、COL1A、β-catenin表达,影响牙周炎OBMSCs的成骨分化能力.
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