观察脂肪源干细胞(ADSC )与聚丙烯网片体内外的生物相容性。
方法制备兔脂肪源性干细胞悬液,行流式细胞术鉴定。取聚丙烯网片浸提液培养ADSC。用MTT法检测24、48、72 h实验组(聚丙烯网片材料浸提液)、阴性对照组(10% FBS的低糖DMEM)与阳性对照组(6.4%苯酚溶液)的细胞活力,评价支架细胞毒性。ADSC传代扩增后,接种到聚丙烯网片支架上,体外培养1周,用扫描电子显微镜观察细胞在支架上黏附生长及增殖。分别将聚丙烯网片、ADSC复合聚丙烯网片植入新西兰大白兔的腹直肌表面,4周后观察网片腐蚀、粘连情况,HE染色进行组织学观察,采用RT-PCR技术动态检测网片周围组织VEGF mRNA的表达水平。
结果ADSC强阳性表达CD90、CD44及CD73 (98.54 %、95.32 %、98.49 %),低表达CD45、CD34及CD14(1.21 %、3.01 %、2.14%)。ADSC在聚丙烯网片浸提液中可保持较高的增殖率,24、48、72 h实验组细胞相对增殖率分别为(97.0±12.5)%、(96.0±10.3)%、(101.0±22.8)%,与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05),与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),聚丙烯网片浸提液无细胞毒性。ADSC种植于两种支架材料后生长速度快,聚丙烯网片、ADSC复合聚丙烯网片均有不同程度的腐蚀、粘连,但聚丙烯网片粘连更致密。与聚丙烯网片比较,ADSC复合聚丙烯网片诱导慢性炎性反应轻,炎性反应评分低[0.6 (0.3 ,0.9 )比1.1(0.9,1.4),P=0.001],新生血管形成[2.6 (2.1 ,3.1)比1.7(1.2, 2.1),P=0.000]和成纤维细胞增殖[2.2 (0.9 ,2.6)比0.9(0.6, 1.5),P=0.001]评分更高。ADSC复合聚丙烯网片周围组织VEGF mRNA含量(1.53±0.11)高于聚丙烯网片(0.96±0.05)(t=11.005 ,P<0.05)。
结论聚丙烯网片支架与ADSC具有良好的生物相容性,可作为脂肪组织工程较理想的生物支架材料。