【摘 要】
:
为了构建稳定表达猪CD163(pCD163)受体的MARC-145细胞系,从猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增pCD163基因,将pCD163基因克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-mCherry中,获得重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry。将重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry与辅助质粒psPAX2、VSVG共转染293T细
【基金项目】
:
广西自然科学基金重点资助项目(2018GXNSFDA281021); 国家重点研发计划资助项目(2018YFD0500100);
论文部分内容阅读
为了构建稳定表达猪CD163(pCD163)受体的MARC-145细胞系,从猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增pCD163基因,将pCD163基因克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-mCherry中,获得重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry。将重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry与辅助质粒psPAX2、VSVG共转染293T细胞,获得具有感染能力的慢病毒粒子,使用慢病毒感染MARC-145细胞,用嘌呤霉素初步筛选阳性细胞,采用终点稀释法筛选出稳定表达pCD163受体的MARC-145细胞。通过RT-PCR扩增pCD163基因及测序分析表明细胞系基因组中存在pCD163受体编码序列,IFA和Western blot试验验证了pCD163受体蛋白在细胞系中稳定表达。用不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GXNN1396(lineage 8)、GXNN202004a(lineage 1)、GXGG202007(lineage 3)分别感染稳定表达pCD163的MARC-145细胞系与MARC-145细胞,PRRSV毒株在表达pCD163的MARC-145细胞系中能够更快达到最高病毒滴度。结果表明,成功构建了稳定表达pCD163的MARC-145细胞系,为快速分离各种谱系PRRSV毒株和相关研究奠定了基础。
其他文献
随着现代农业的深入发展,我国农村集体原始资产得到快速的积累,但同时存在着资产权属不清晰、村集体资产保护制度不适宜等问题,导致“三农”问题迟迟得不到解决,使得农村经济发展缓慢,所以加快推进农村集体产权制度改革对推动我国农业现代化的实现有着战略性的意义。笔者在详细分析我国农村集体产权制度改革遇到的主要问题的基础上,总结了六盘水市先进改革经验,并提出了针对性的解决对策,以期为各农村地区的集体产权改革的落
党的十九届五中全会提出,要"深化农村集体产权制度改革,发展新型农村集体经济。"本文以湖北省黄冈市黄州区农村集体产权制度改革实践为研究对象,在深刻剖析黄州区"六段十六步"工作法的流程步骤和重难点问题的基础上,提出要处理好整体与局部、发展经济与风险防控、政府引导与群众主体三对关系;进一步深入农村集体产权制度改革,必须切实加强党对农村集体产权制度改革的领导,完善农村集体经济管理制度,因地制宜发展壮大农村
为培养符合社会发展的合格人才,教育部门提出了提高学生核心素养的教育理念,而思想道德和良好法律意识是核心素养的重要内容。因此,为提高学生的道德品质和法律意识,初中阶段开设了道德与法治课程。但现阶段,道德与法治课程的教学仍存在很多问题。文章将阐述把情感教育融入教学活动中的意义和策略,以激发学生的学习兴趣,提高教师的教学质量。
旋喷锚是一种新型的填土层支护工具,打孔和注浆作业可以同时进行,能够缩短工期。文章主要介绍了旋喷锚在填土层边坡支护中的应用,并通过六次试验,验证了旋喷锚在实际工程支护中的可行性和可靠性。
目前,全省涉及农村集体产权制度改革的乡村已全部完成改革任务。通过改革,摸清了集体资产家底,清晰了产权关系,初步建立了资产管理体制。但如何进一步"活化"集体资产,发挥其在推进乡村全面振兴中的作用,仍面临一些困难和问题:一是集体经济的基础仍然较弱。据2020年统计,全省49,494个行政村中,
基于项目化的学习不会限制学生的发展。它追求的不是以唯一答案为目的的学习,而是可以让学生在研究性问题的引导下,将之前学到的知识用于新的情境,以此来解决问题。在目前的教育环境下,高中数学的教学现状大多还在低阶段徘徊,学生进行机械化的学习,教学的现状不容乐观。为了能够突破这一现实局限,适应新时期新生代培养的标准,数学教师正开始探索以学生为主体的高阶教学模式,高中数学项目化学习逐渐成为课堂教学活动开展的主
如今,农村建设的重点集中于农村集体经济产权制度革新方面。其本质是根据股份合作制的基本原则,把集体资产进行折股量化到农民,将农民共有产权机制转变成农民按照份额共有的产权机制。中央政府对于促进农村集体产权制度改革给予重视,在反复强调这项改革机制必要性的基础上,中央政府积极颁布《加大改革创新力度加快农业现代化建设的意见》等政策制度,对于农村集体产权制度改革提出进一步要求。
【目的】研究氮磷钾配施对北苍术的产量、苍术素含量及乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性和基因表达量的影响,探讨氮磷钾配施对北苍术药材产量增加、质量形成的影响及其机制,对提高北苍术药材产量及质量有重要的现实意义。【方法】以一年生北苍术为试验材料,采用L9(34)正交设计,设置10个不同氮、磷、钾用量处理的田间试验,在营养生长期、花期、初果期、盛果期及枯萎期测定北苍术的地上部分、根茎和须根鲜重;采用高效液相
目的探究布地奈德+特布他林雾化吸入治疗咳嗽变异型哮喘的临床效果及对患儿肺功能的影响。方法选取2018年3月至2020年9月我院收治的86例咳嗽变异型哮喘患儿的病例资料,按照随机数字表法将其分为观察组(43例,布地奈德+特布他林雾化吸入治疗)和对照组(43例,布地奈德雾化吸入治疗)。比较两组的肺功能指标、血清炎症因子水平及临床疗效。结果治疗前,两组的FVC、FEV1、PEF比较,差异无统计学意义(P
目的:探讨孟鲁司特钠联合氨溴索治疗哮喘的效果及对患儿肺功能的影响。方法:选取东港市中心医院2019年1月-2020年12月收治的60例哮喘患儿作为研究对象,依据用药方案的差异将患儿分为两组。对照组应用氨溴索治疗,研究组应用孟鲁司特钠联合氨溴索治疗。对比两组疗效、炎症因子水平、药物不良反应、肺功能水平以及血气指标水平。结果:研究组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);治疗后,研究组肿瘤坏死因子(T