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目的 将人膜联蛋白V基因突变后转化入毕赤酵母重组表达，从培养液中纯化出具有内在金属螫合位点的活性突变型人膜联蛋白V。方法 应用特异引物将天然人膜联蛋白V基因的5’和3’端进行突变改造，将突变型膜联蛋白V基因插入到pPIC9K质粒并进行基因测序鉴定。将正确连接的表达质粒线性化后用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115中。通过MD平板筛选转化子、BMGY培养基培养、甲醇诱导表达目的蛋白质。培养物经过离心获取上清液，用SDS-PAGE和银染分析蛋白质的表达情况，通过外露磷脂酰丝氨酸的红细胞和异硫氰酸荧光素标记膜联蛋白