观察大肠杆菌脂多糖(LPS)是否可在体外诱导小鼠血小板凋亡的发生。

制备洗涤血小板悬液，调整血小板终浓度至3×10⁸/mL。根据刺激剂不同分为对照组〔无钙台式缓冲液(TB)〕、凝血酶处理组(终浓度1 U/mL，无钙TB制备)和不同浓度LPS处理组(终浓度1、10、100 μg/mL，无钙TB制备)。各组加入相应刺激剂后室温孵育30 min。应用化学发光法检测三磷酸腺苷(ATP)含量及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性；用流式细胞仪检测血小板膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)阳性率以反映磷酯酰丝氨酸(PS)暴露水平；用流式细胞仪测定血小板平均通道荧光强度(MCF)以反映线粒体内膜电位(ΔΨm)去极化。

与对照组比较，凝血酶处理组血小板ATP水平明显降低〔相对荧光强度(RLU)：(5.46±0.14)×10⁵比(6.25±0.26)×10⁵，P<0.05〕，AnnexinⅤ阳性率〔(50.43±2.45)%比(1.58±0.25)%，P<0.05〕和caspase-3活性〔RLU：(26.92±1.60)×10³比(1.30±0.10)×10³，P<0.05〕均明显升高，血小板MCF明显降低〔(8.32±0.58)×10⁴比(13.05±1.10)×10⁴，P<0.05〕，说明ΔΨm去极化增加。给予不同浓度LPS处理后，血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性均明显升高，血小板MCF明显降低，说明ΔΨm去极化增加，且呈浓度依赖性。与对照组比较，1 μg/mL LPS即可使AnnexinⅤ阳性率增加〔(10.45±1.08)%比(1.58±0.25)%，P<0.05〕，caspase-3活性升高〔RLU：(14.06±0.61)×10³比(1.30±0.10)×10³，P<0.05〕，MCF明显降低〔(9.48±0.50)×10⁴比(13.05±1.10)×10⁴，P<0.05〕。经100 μg/mL LPS处理后血小板ATP水平、AnnexinⅤ阳性率和caspase-3活性最高，且均明显高于对照组〔ATP(RLU)：(7.00±0.03)×10⁵比(6.25±0.26)×10⁵，AnnexinⅤ阳性率：(55.35±2.42)%比(1.58±0.25)%，caspase-3(RLU)：(32.00±3.75)×10³比(1.30±0.10)×10³，均P<0.05〕；血小板MCF最低，且明显低于对照组〔(4.69±0.55)×10⁴比(13.05±1.10)×10⁴，P<0.05〕。

大肠杆菌LPS可体外诱导小鼠血小板ATP升高、PS暴露、ΔΨm去极化及caspase-3活性增加，说明LPS可诱导血小板凋亡，且呈浓度依赖性。