【摘 要】
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目的 研究微RNA(miR)-20a-5p对缺氧肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 运用实时定量(qRT)-PCR法检测原代人肺动脉平滑肌细胞HPASMC、缺氧原代人肺动脉平滑肌
【机 构】
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郑州大学附属儿童医院心血管内科 450052
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目的 研究微RNA(miR)-20a-5p对缺氧肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 运用实时定量(qRT)-PCR法检测原代人肺动脉平滑肌细胞HPASMC、缺氧原代人肺动脉平滑肌细胞HPASMC中miR-20a-5p、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)的mRNA的表达;将anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-20a-5p组(转染anti-miR-20a-5p)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-20a-5p组(转染miR-20a-5p mimics)、anti-miR-20a-5p+si-NC组(共转染anti-miR-20a-5p和si-NC)、anti-miR-20a-5p+si-CDKN1A组(共转染anti-miR-20a-5p和si-CDKN1A),均用脂质体法转染至HPASMC细胞,在进行缺氧处理.免疫印迹检测细胞中CDKN1A的蛋白表达;流式细胞术检测细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果 与原代人肺动脉平滑肌细胞HPASMC相比,缺氧原代人肺动脉平滑肌细胞HPASMC中miR-20a-5p的表达显著升高,CDKN1A的表达显著降低;抑制miR-20a-5p或过表达CDKN1A均可明显上调缺氧HPASMC细胞的凋亡率;miR-20a-5p可抑制野生型CDKN1A细胞的荧光活性,且可负向调控CDKN1A的表达.敲减CDKN1A可逆转抑制miR-20a-5p对缺氧HPASMC细胞的凋亡促进作用.结论 抑制miR-20a-5p可促进缺氧肺动脉平滑肌细胞凋亡,其机制可能与miR-20a-5p靶向CDKN1A有关,将可为缺氧性肺动脉高压的治疗提供新靶点.
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