研究miRNA-96-5p在胃癌细胞和组织中的表达水平以及对胃癌细胞增殖、侵袭的影响和分子机制。
方法收集2015年6月至2017年1月手术切除的胃癌标本53例,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中miRNA-96-5p的表达水平,采用免疫组化法检测叉头框蛋白Q1(FoxQ1)蛋白的表达,分析miRNA-96-5p的表达与胃癌患者临床病理特征和FoxQ1蛋白表达的相关性。采用实时荧光定量PCR法检测miRNA-96-5p在胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达。以miRNA-96-5p模拟物转染人胃癌BGC-823细胞,采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测BGC-823细胞的增殖,采用Transwell小室法检测BGC-823细胞的侵袭,采用Western blot法检测FoxQ1、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达。采用双荧光素酶活性实验验证miRNA-96-5p对FoxQ1的靶向作用。
结果胃癌组织中miRNA-96-5p的中位表达水平为1.05,明显低于癌旁组织(3.23,P<0.05)。胃癌组织中FoxQ1蛋白的阳性表达率(71.7%)明显高于癌旁组织(28.3%,P<0.05)。相关性分析显示,FoxQ1蛋白在胃癌组织中的表达与miRNA-96-5p的表达呈负相关(r=-0.613,P=0.006)。miRNA-96-5p在胃癌BGC-823细胞中的表达水平为0.96±0.08,低于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(2.84±0.15,P<0.05)。与空白对照组和miRNA模拟物对照组BGC-823细胞比较,miRNA-96-5p模拟物组BGC-823细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制(均P<0.05),且miRNA-96-5p模拟物组BGC-823细胞中FoxQ1和Vimentin蛋白的表达水平降低,E-cadherin蛋白的表达水平增高。双荧光素酶报告基因检测结果显示,FoxQ1是miRNA-96-5p的靶基因。
结论miRNA-96-5p在胃癌组织和细胞中表达下调,miRNA-96-5p通过调控FoxQ1基因的表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化。