【摘 要】
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目的:构建靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用.方法:设计合成靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNAcDNA序列并与pSUPER载体连接,构建
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目的:构建靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体并在体外检测其对VEGF基因表达的抑制作用.方法:设计合成靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNAcDNA序列并与pSUPER载体连接,构建VEGF siRNA表达载体,经酶切鉴定和测序确认后,脂质体2000介导VEGF siRNA转染HepG2细胞.RT-PCR及Western blot检测VEGF siRNA表达载体转染的HepG2细胞中VEGF基因表达.结果:通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了靶向HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体.RT-PCR和Western blot法检测转染VEGF siRNA表达载体的HepG2细胞VEGF mRNA及VEGF165表达下调,其抑制率分别为65%和74%.实验组中的HepG2中VEGF mRNA表达较阴性对照组、空载体组表达量显著下降(0.304±0.062vs0.896±0.061,0.884±0.074,P<0.05).结论:成功构建了靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的siRNA表达载体,且该载体在体外能有效抑制HepG2细胞VEGF基因表达.
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