目的　构建并表达 hs TNFR (hum an soluble tum or necrosis factorreceptor ) - GFP(green fluorescence pro-tein) - p ET2 8a融合蛋白 ,用以检测跨膜型 TNF- α(m TNF- α)。方法　用 PCR从 GFP- p KEN重组质粒中扩增 GFP的 c D-NA,将其插入 hs TNFR - p ET2 8a重组质粒中 hs TNFR 基因片段的下游 ,获得 hs TNFR - GFP- p ET2 8a重组体。转化大肠杆菌 BL- 2 1,用 IPTG诱导重组蛋白表达 ,经镍金属螯合层析柱纯化。用 MTT法检测重组融合蛋白对 s TNF- α细胞毒效应的抑制活性 ,并用重组融合蛋白直接对转染 TNF基因细胞表面的 m TNF- α进行定性检测。结果　 hs TNFR -GFP重组融合蛋白可明显抑制 s TNF- α细胞毒效应 ,且呈剂量依赖性 ;该融合蛋白不但可与 NIH3T3细胞膜上鼠源性m TNF- α结合 ,而且也可与转基因 NIH3T3细胞表面人 m TNF- α结合。结论　 hs TNFR - GFP重组融合蛋白具有 TN-FR的生物学活性 ,同时保留 GFP的发光特性 ,可用来检测细胞表达 m TNF- α的水平