【摘 要】
：
目的从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因
【基金项目】
：
重大新药创制科技重大专项(2008ZXJ09003-009,2012ZX09J12106-02B)
论文部分内容阅读
目的从分泌抗SEB的单克隆抗体(FMU-SEB-No.1)杂交瘤细胞中,克隆出FMU-SEB-No.1重链和轻链可变区(VH和VL)基因,构建FMU-SEB-No.1单链抗体(scFv)的原核表达载体,并进行scFv基因的蛋白表达。方法从FMU-SEB-No.1杂交瘤细胞中提取总RNA,采用RT-PCR扩增出VH和VL基因;通过在引物上设计linker序列,拼接VH和VL为完整FMU-SEB-No.1的scFv基因(FMU-SEB-scFv)。将测序正确的scFv基因克隆入PGEX4T-1载体,转化入E.coli BL21(DE3)进行蛋白表达。通过SDS-PAGE,Western blot法分析其表达水平和特异性,酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其抗原结合活性。结果测序结果显示,本实验成功克隆出FMU-SEB-No.1重链及轻链可变区基因,并成功构建FMU-SEB-scFv基因,所得的基因全长为750 bp,编码250个氨基酸。SDS-PAGE和Western blot分析表明,PGEX4T1-FMU-SEB-scFv在E.coli BL21(DE3)可表达为Mr约54 000的可溶型scFv/GST融合蛋白。间接ELISA检测结果表明,可溶型scFv/GST融合蛋白与SEB具有较高的抗原结合活性。结论制备并鉴定了针对SEB的基因工程抗体,为开发出针对SEB的治疗性抗体奠定了实验基础。
其他文献
当下的工业时代社会在快速变革中,知识经济的时代已经早早到来,企业经营管理中最重要的资源已经是把从投入原料、劳动力、资本等传统的方式变化到以知识的创造和转移为主的企
目的观察替格瑞洛用于冠脉弥漫长病变行经皮冠脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)的安全性及有效性。方法选择河北省邢台市第三医院行冠脉造影检查为冠脉弥
从司法实践来看,不作为犯的判决中,不纯正不作为犯的数量居多。虽然在理论上,所有的犯罪都可以通过不作为实施,但司法实践中对不作为犯的认定上缺乏等价性的考察,不当扩张了
目的探讨采用重组人粒细胞集落刺激因子残液(G-CSF)治疗肿瘤化疗患者口腔溃疡的效果。方法将56例肿瘤化疗致口腔溃疡患者随机分为实验组和对照组各28例。实验组采用重组人粒
烷基苯酚(APs)是一类环境内分泌激素,具有生殖、免疫和神经等多种生物毒性,对水生动物、两栖类和哺乳类动物的性别分化和生殖产生较大危害,同时对人类的健康具有潜在危害。由
为研究不同钢纤维体积分数与不同钢纤维长径比对混凝土基体抗冲击性能增强作用的影响,利用ANSYS/LSDYNA3D有限元计算软件,采用损伤材料模型,数值模拟了钢纤维混凝土圆柱体撞
目的研究剖宫产时行肌瘤剔除在治疗妊娠合并子宫肌瘤中的可行性和安全性。方法选择在该院就诊的妊娠合并子宫肌瘤患者,随机分为剖宫产同时行子宫肌瘤切除术的观察组和剖宫产
<正> 0 前言早在五十年代,当泡沫浴和乳液浴产品开始盛行时,化妆品中已开始使用植物组分。这些产品中常加入大量挥发油,它既有功效,又使人在用后感到愉快。直到六十年代中期,
<正> 当一个企业决定进入国际市场进行角逐的时候,它不仅面临着各种国际营销策略的选择,而且还面临着选择何种手段透入市场的问题。然而,在多数情况下,很多涉足国际市场资历
研究了云斑天牛各虫态与防治有关的生物学特性；提出了雌、雄蛹和林间不同发育阶段成虫形态特征的判别指标；讨论了云斑天牛习性与防治、各虫态发生期与节气物候的关系