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摘 要：采用高效液相色谱法测定牛奶中灭草烟的含量。将牛奶样品用二氯甲烷进行涡旋混合、振荡、离心提取后，经C18固相萃取柱净化，柱温35 ℃，进样量5 μL，流动相为甲醇︰水=90︰10，水用磷酸调节pH至3.5，流速1 mL/min，紫外检测波长240 nm，以外标法定量。结果表明，灭草烟除草剂在质量浓度2～10 mg/mL范围内，标准曲线线性相关系数0.999 7，牛奶中灭草烟的平均加标回收率84.52%～92.52%。此方法操作简便，重现性较好，可以为牛奶中灭草烟及其他5种咪唑啉酮类除草剂含量的测定提供参考。
关键词：灭草烟;咪唑啉酮;高效液相色谱法;牛奶
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（美国赛默飞U3000）;十二孔固相萃取装置;Seq-Pak C18固相萃取柱;旋转蒸发仪。0.45 μm超微孔滤膜;标准物质灭草烟（咪唑烟酸，纯度≥99%）。甲醇为色谱纯，二氯甲烷、丙酮、乙腈为分析纯。
1.2 实验方法
1.2.1 样品的处理
准确称取牛奶样品1 g于离心管之中，取2个离心管分别标号为Y1（样品1）、Y2（对照1）作为两个样品样管，用二氯甲烷定容至10 mL，涡旋混合，离心机离心，转速为4 000 r/min。取下层有机层5 mL于容量瓶之中，用二氯甲烷定容至10 mL以待净化。
1.2.2 样品净化
将样品提取液沿SPE C18柱（活化后使用）的管壁缓缓倾入。在流速约为2 mL/min的条件下将5 mL丙酮、5 mL乙腈、5 mL甲醇，依次加入SPE柱进行淋洗。用5 mL体积比为5︰95的5%氨水-甲醇混合溶液进行洗脱。
1.2.3 样品的浓缩
在45 ℃下将待浓缩溶液蒸发至近干，使用流动相溶解并定容。溶液用0.45 μm的有机相滤膜过滤之后加入进样瓶中进行高效液相色谱分析。
1.2.4 标准溶液的配制
准确称取适量灭草烟标准品（精确至 0.000 1 g）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成10 mg/mL标样储备液，储存于冰箱内。灭草烟标准储备液用甲醇稀释成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL和10 mg/mL标准溶液。
1.2.5 HPLC条件
色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;柱温：35 ℃;进样量：5 μL;检测波长：240 nm;流动相：甲醇︰水=90︰10，需要用磷酸调节pH值为3.5，经过滤膜过滤并脱气;流速，1.0 mL/min[1-5]。
1.2.6 样品的测定
灭草烟根据色谱保留时间定性，外标法定量。以灭草烟质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。根据标准曲线计算试样溶液浓度，按式（1）计算土壤样品中乙草胺和烯草酮的残留量[6-8]。
式中，X-牛奶中灭草烟的质量，mg;ρ-试样溶液中灭草烟的质量浓度，mg/mL;V-所配的溶液体积，mL。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的绘制
不同浓度梯度的标准样品，所测得的色谱图见图1，测得样品色谱图见图2，标准曲线图见图3，线性方程为y=546 883x+17 754，r=0.999 7，线性范围2～10 mg/mL。
2.2 回收率实验和精密度计算
取不含待测物品的样品，按照1.2方法分3组，每组5支加标回收样品管，进行加标回收实验和精密度计算，结果见表1。在6～10 mg/mL的标准物质的添加条件下，实验的加标回收率在84%以上，相对标准偏差为5.7%～7.5%，实验证明本方法准确度和精密度较为良好。
3 结论
本实验对牛奶中灭草烟的测定过程中，采用二氯甲烷作为提取剂，C18固相萃取小柱进行萃取、净化。利用高效液相色谱法检测样品牛奶中咪唑啉酮类除草剂灭草烟的残留，本次实验所得线性方程为y=546 883x+17 754，r=0.999 7，线性范围2～10 mg/mL。加标回收率84%以上，相对标准偏差为5.7%～7.5%。本方法准确度和精密度较为良好，可广泛推广应用。
参考文献
[1]杨秋红，程小艳，杨坪，等.固相萃取高效液相色谱串联质谱法同时检测地表水中的2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚[J].分析化学，2011，39（8）：1208-1212.
[2]PYRZYNSKA K，TROJANOWICZ M.Functionalized cellulose sorbents for preconcentration of trace metals in environmental analysis[J].Critical Reviews Analytical Chemistry，1999，29（4）：313-321.
[3]刘建林，张琛，王夏娇，等.基于碳纳米管的固相萃取分散液液微萃取测定水中多种痕量环境雌激素[J].高等学校化学学报，2012，33（1）：37-43.
[4]姜俊，李培武，谢立华，等.固相萃取-全二维气相色谱/飞行时间质谱同步快速检测蔬菜中64种农药残留[J].分析化学，2011，39（1）：72-76.
[5]叶贵标，张微，崔昕，等.高效液相色谱/质谱法测定土壤中10种磺酰脲类除草剂多残留[J].分析化学，2006，34（9）：1207-1212.
[6]ANIZIO M F，LIANE M，C’ESAR C S，et al.Poly （methyltetradecylsiloxane） immobilized onto silica for extraction of multiclass pesticides from surface waters[J].Analytica Chimica Acta，2007，582（1）：34-40.
[7]BARKANI H，CATASTINIA C，EMMELIN C，et al.Study of the phototransformation of imazaquin in aqueous solution：a kinetic approach[J].Photochemistry and Photobiology A：Chemistry，2005，170（1）：27-35.
[8]陳夏娇.咪唑烟酸的高效液相色谱法测定[J].广西植保，2014，27（2）：15-17.
关键词：灭草烟;咪唑啉酮;高效液相色谱法;牛奶
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪（美国赛默飞U3000）;十二孔固相萃取装置;Seq-Pak C18固相萃取柱;旋转蒸发仪。0.45 μm超微孔滤膜;标准物质灭草烟（咪唑烟酸，纯度≥99%）。甲醇为色谱纯，二氯甲烷、丙酮、乙腈为分析纯。
1.2 实验方法
1.2.1 样品的处理
准确称取牛奶样品1 g于离心管之中，取2个离心管分别标号为Y1（样品1）、Y2（对照1）作为两个样品样管，用二氯甲烷定容至10 mL，涡旋混合，离心机离心，转速为4 000 r/min。取下层有机层5 mL于容量瓶之中，用二氯甲烷定容至10 mL以待净化。
1.2.2 样品净化
将样品提取液沿SPE C18柱（活化后使用）的管壁缓缓倾入。在流速约为2 mL/min的条件下将5 mL丙酮、5 mL乙腈、5 mL甲醇，依次加入SPE柱进行淋洗。用5 mL体积比为5︰95的5%氨水-甲醇混合溶液进行洗脱。
1.2.3 样品的浓缩
在45 ℃下将待浓缩溶液蒸发至近干，使用流动相溶解并定容。溶液用0.45 μm的有机相滤膜过滤之后加入进样瓶中进行高效液相色谱分析。
1.2.4 标准溶液的配制
准确称取适量灭草烟标准品（精确至 0.000 1 g）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成10 mg/mL标样储备液，储存于冰箱内。灭草烟标准储备液用甲醇稀释成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL和10 mg/mL标准溶液。
1.2.5 HPLC条件
色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;柱温：35 ℃;进样量：5 μL;检测波长：240 nm;流动相：甲醇︰水=90︰10，需要用磷酸调节pH值为3.5，经过滤膜过滤并脱气;流速，1.0 mL/min[1-5]。
1.2.6 样品的测定
灭草烟根据色谱保留时间定性，外标法定量。以灭草烟质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。根据标准曲线计算试样溶液浓度，按式（1）计算土壤样品中乙草胺和烯草酮的残留量[6-8]。
式中，X-牛奶中灭草烟的质量，mg;ρ-试样溶液中灭草烟的质量浓度，mg/mL;V-所配的溶液体积，mL。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的绘制
不同浓度梯度的标准样品，所测得的色谱图见图1，测得样品色谱图见图2，标准曲线图见图3，线性方程为y=546 883x+17 754，r=0.999 7，线性范围2～10 mg/mL。
2.2 回收率实验和精密度计算
取不含待测物品的样品，按照1.2方法分3组，每组5支加标回收样品管，进行加标回收实验和精密度计算，结果见表1。在6～10 mg/mL的标准物质的添加条件下，实验的加标回收率在84%以上，相对标准偏差为5.7%～7.5%，实验证明本方法准确度和精密度较为良好。
3 结论
本实验对牛奶中灭草烟的测定过程中，采用二氯甲烷作为提取剂，C18固相萃取小柱进行萃取、净化。利用高效液相色谱法检测样品牛奶中咪唑啉酮类除草剂灭草烟的残留，本次实验所得线性方程为y=546 883x+17 754，r=0.999 7，线性范围2～10 mg/mL。加标回收率84%以上，相对标准偏差为5.7%～7.5%。本方法准确度和精密度较为良好，可广泛推广应用。
参考文献
[1]杨秋红，程小艳，杨坪，等.固相萃取高效液相色谱串联质谱法同时检测地表水中的2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚[J].分析化学，2011，39（8）：1208-1212.
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[3]刘建林，张琛，王夏娇，等.基于碳纳米管的固相萃取分散液液微萃取测定水中多种痕量环境雌激素[J].高等学校化学学报，2012，33（1）：37-43.
[4]姜俊，李培武，谢立华，等.固相萃取-全二维气相色谱/飞行时间质谱同步快速检测蔬菜中64种农药残留[J].分析化学，2011，39（1）：72-76.
[5]叶贵标，张微，崔昕，等.高效液相色谱/质谱法测定土壤中10种磺酰脲类除草剂多残留[J].分析化学，2006，34（9）：1207-1212.
[6]ANIZIO M F，LIANE M，C’ESAR C S，et al.Poly （methyltetradecylsiloxane） immobilized onto silica for extraction of multiclass pesticides from surface waters[J].Analytica Chimica Acta，2007，582（1）：34-40.
[7]BARKANI H，CATASTINIA C，EMMELIN C，et al.Study of the phototransformation of imazaquin in aqueous solution：a kinetic approach[J].Photochemistry and Photobiology A：Chemistry，2005，170（1）：27-35.
[8]陳夏娇.咪唑烟酸的高效液相色谱法测定[J].广西植保，2014，27（2）：15-17.