论文部分内容阅读
目的
本研究旨在探讨miR-144对神经母细胞瘤的侵袭和转移的影响，并探索miR-144是否通过靶定ITGβ1调节神经母细胞瘤的侵袭和转移。
方法利用生物信息学技术预测miR-144的靶基因ITGβ1，应用荧光报告基因检测以及荧光定量PCR、Western Blot实验对靶基因进行验证。在神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-BE分别瞬时转染化学合成的成熟双链miR-144和靶基因敲降质粒及对照质粒，建立过表达miR-144细胞模型和靶基因敲降细胞模型。通过Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的体外侵袭和转移能力。
结果Transwell实验结果表明，在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和SK-N-BE中过表达miR-144后，细胞的侵袭数目分别为41±2和55±2，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。抑制ITGβ1基因的表达后，体外划痕实验结果表明，过表达miR-144后，与对照组相比，SH-SY5Y和SK-N-BE细胞的转移能力分别下降了65.45%和75.41%(P<0.01)。荧光报告基因检测结果显示过表达miR-144后，含有结合位点的荧光报告质粒的相对荧光量降低了37.11%(P<0.01)，而将结合位点进行基因突变后miR-144对靶基因的抑制作用消失。过表达miR-144后，与对照组相比，SH-SY5Y和SK-N-BE细胞内的ITGβ1 mRNA水平分别降低了40%和43%，Western Blot检测结果显示，ITGβ1蛋白水平分别降低了39%和40%。
结论miR-144通过靶定ITGβ1基因抑制神经母细胞瘤的侵袭和转移过程。