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摘 要 目的:探讨大肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法:采用流式细胞仪测定大肠癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照分析。结果:大肠患者外周血CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+比值较正常对照组均明显下降(P<0.05),而CD8+细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与大肠癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3+、CD4+及NK细胞数量CD4+/CD8+细胞比值越低,CD8+细胞水平越高(P<0.05)。结论:检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于大肠癌患者的免疫状态监测。
关键词 大肠肿瘤 T淋巴细胞亚群 流式细胞术
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.01.126
资料与方法
2007年1月～2008年8月收治大肠癌患者42例,均经病理确诊。男27例,女15例;年龄36～72岁,平均52±9.8岁,均经病理学证实且不伴有自身免疫性疾病。病理组织学分型:腺癌20例,黏液癌12例,未分化癌10例。临床分期:Ⅱ期14例,Ⅲ期16例,Ⅳ期12例。另选性别、年龄相匹配的30例健康志愿者作为正常对照组。所有受检对象均无免疫系统疾病或使用过免疫抑制剂。
检测方法:取肝素抗凝的新鲜外周血100μl,加入上述单抗20μl,混匀,室温避光20分钟染色;加入1.5ml红细胞裂解液,混匀后室温避光放置10分钟,破坏红细胞;1500转/分钟离心5分钟,弃上清;每管加入2ml 0.1%叠氮钠的磷酸盐缓冲液混匀,1000r/俊逸离心5分钟,弃上清;加PBS 1ml,混匀,2小时内上机检测。以FSC H/SSC H设定淋巴细胞门,IgG/FITC/IgG 2aPE确定FL1和FL2的非特异性结合水平,同时调节FSC、SSC电压,FSC阈值,FL1、FL2%、FL2、FL1%荧光补偿。每管获取1万个细胞。
统计学处理:采用SPSS13.0统计软件,数据用X±S表示,组间比较采用t检验,关联分析用线性相关分析。
结 果
42例大肠癌患者与正常对照组T细胞亚群检测结果表明:大肠癌组CD3+、CD4+细胞百分比明显低于正常对照组(P>0.01),而CD8+百分比两组无明显差异(P>0.05),大肠癌组CD4+/CD8+与正常对照组相比虽有下降趋势,但无统计学意义(P>0.05)。
淋巴结阳性组CD3+、CD4+细胞又显著低于淋巴结阴性组(P<0.05)。CD4+/CD8+比值淋巴结阴性组与正常对照组无显著差异,而淋巴结阳性组CD4+/CD8+比值与正常对照组及淋巴结阴性组均有非常显著差异(P<0.01)。CD8+细胞变化则表现特殊,即淋巴结阴性组CD8+细胞明显低于正常对照组及淋巴结阳性组(P<0.05),淋巴结阳性组CD8+细胞较正常对照组有增高趋势,但无统计意义(P>0.05)。
讨 论
大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,发病率呈上升趋势。肿瘤的发生发展与肿瘤宿主的免疫状态密切相关,细胞免疫在机体的抗肿瘤免疫中占主导地位。
机体的免疫系统是在生物进化中逐步建立起来的,其存在与功能的正常建立在机体稳定性的基础上。在正常情况下,机体的自身免疫功能可以防御病原微生物的侵袭,消除体内损伤或变老的自身细胞,处理体内出现的少量异常细胞。
当人体的免疫监视功能失调时,常可导致肿瘤的发生、发展。肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关,特别与T淋巴细胞功能的关系更密切[1]。T细胞的免疫调节作用主要由CD4+、CD8+完成,CD4+协调B细胞分化产生抗体,CD8+则抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖,两者的稳态维持着机体正常的免疫应答。
本研究结果显示,大肠癌患者外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值均明显低于正常人,而CD8+细胞则明显高于正常人,与文献报道一致[2],说明大肠癌患者免疫功能较正常人明显低下,其机制可能与肿瘤在发生、发展过程中分泌大量的免疫抑制因子(TDSF)有关[3],TDSF可广泛抑制杀伤细胞的活性,同时在肿瘤抗原的刺激下,脾细胞免疫抑制细胞前体被激活,分泌免疫抑制因子,从而导致大肠癌患者免疫功能低下。由于这种免疫抑制是肿瘤源性的,因此表现为患者的免疫状态与病情呈显著的负相关,在本研究中,随着大肠癌患者病情的发展,由Ⅰ期至Ⅳ期机体外周血细胞免疫功能逐渐下降,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著性差异,提示大肠癌患者免疫状态与TNM分期呈负相关,患者的病期越晚,免疫状态越差,反之,患者的免疫功能越低下,提示病期越晚、预后越差。故患者的免疫状态可间接提示患者预后。
大肠癌患者外周血CD3+、CD4+和CD8+细胞随肿瘤不同阶段出现特征性改变,表明大肠癌患者细胞免疫功能受到抑制。同时也反映了机体抗肿瘤作用。CD4+/CD8+比值随淋巴结转移与否而出现相应的改变,这一定量检测的结果可以对淋巴结转移为判断患者预后指标的评估起辅助作用。同时提示,肿瘤是一种全身性疾病,在肿瘤根治性切除的基础上,应进行包括提高机体免疫的综合治疗。
参考文献
1 Kuss I,Hathway B,Ferris RL,et al.Decreased absolute counts of T lymphocyte subsets and their relation to disease in squamous cell carcinoma of the head and neck.Clin Cancer Res,2004,10(11):3755-3762.
2 石彦,余佩武,雷晓,等.胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的研究.重庆医学,2004,33(2):229-231.
3 seddiki n,santner-nanan b,martinson j,et al.expression of interleukin (il)-2 and il-7 receptors discriminates between human regulatory and activated t cells.j exp med,2006,203(7):1693-1700.
关键词 大肠肿瘤 T淋巴细胞亚群 流式细胞术
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.01.126
资料与方法
2007年1月～2008年8月收治大肠癌患者42例,均经病理确诊。男27例,女15例;年龄36～72岁,平均52±9.8岁,均经病理学证实且不伴有自身免疫性疾病。病理组织学分型:腺癌20例,黏液癌12例,未分化癌10例。临床分期:Ⅱ期14例,Ⅲ期16例,Ⅳ期12例。另选性别、年龄相匹配的30例健康志愿者作为正常对照组。所有受检对象均无免疫系统疾病或使用过免疫抑制剂。
检测方法:取肝素抗凝的新鲜外周血100μl,加入上述单抗20μl,混匀,室温避光20分钟染色;加入1.5ml红细胞裂解液,混匀后室温避光放置10分钟,破坏红细胞;1500转/分钟离心5分钟,弃上清;每管加入2ml 0.1%叠氮钠的磷酸盐缓冲液混匀,1000r/俊逸离心5分钟,弃上清;加PBS 1ml,混匀,2小时内上机检测。以FSC H/SSC H设定淋巴细胞门,IgG/FITC/IgG 2aPE确定FL1和FL2的非特异性结合水平,同时调节FSC、SSC电压,FSC阈值,FL1、FL2%、FL2、FL1%荧光补偿。每管获取1万个细胞。
统计学处理:采用SPSS13.0统计软件,数据用X±S表示,组间比较采用t检验,关联分析用线性相关分析。
结 果
42例大肠癌患者与正常对照组T细胞亚群检测结果表明:大肠癌组CD3+、CD4+细胞百分比明显低于正常对照组(P>0.01),而CD8+百分比两组无明显差异(P>0.05),大肠癌组CD4+/CD8+与正常对照组相比虽有下降趋势,但无统计学意义(P>0.05)。
淋巴结阳性组CD3+、CD4+细胞又显著低于淋巴结阴性组(P<0.05)。CD4+/CD8+比值淋巴结阴性组与正常对照组无显著差异,而淋巴结阳性组CD4+/CD8+比值与正常对照组及淋巴结阴性组均有非常显著差异(P<0.01)。CD8+细胞变化则表现特殊,即淋巴结阴性组CD8+细胞明显低于正常对照组及淋巴结阳性组(P<0.05),淋巴结阳性组CD8+细胞较正常对照组有增高趋势,但无统计意义(P>0.05)。
讨 论
大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,发病率呈上升趋势。肿瘤的发生发展与肿瘤宿主的免疫状态密切相关,细胞免疫在机体的抗肿瘤免疫中占主导地位。
机体的免疫系统是在生物进化中逐步建立起来的,其存在与功能的正常建立在机体稳定性的基础上。在正常情况下,机体的自身免疫功能可以防御病原微生物的侵袭,消除体内损伤或变老的自身细胞,处理体内出现的少量异常细胞。
当人体的免疫监视功能失调时,常可导致肿瘤的发生、发展。肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关,特别与T淋巴细胞功能的关系更密切[1]。T细胞的免疫调节作用主要由CD4+、CD8+完成,CD4+协调B细胞分化产生抗体,CD8+则抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖,两者的稳态维持着机体正常的免疫应答。
本研究结果显示,大肠癌患者外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+细胞比值均明显低于正常人,而CD8+细胞则明显高于正常人,与文献报道一致[2],说明大肠癌患者免疫功能较正常人明显低下,其机制可能与肿瘤在发生、发展过程中分泌大量的免疫抑制因子(TDSF)有关[3],TDSF可广泛抑制杀伤细胞的活性,同时在肿瘤抗原的刺激下,脾细胞免疫抑制细胞前体被激活,分泌免疫抑制因子,从而导致大肠癌患者免疫功能低下。由于这种免疫抑制是肿瘤源性的,因此表现为患者的免疫状态与病情呈显著的负相关,在本研究中,随着大肠癌患者病情的发展,由Ⅰ期至Ⅳ期机体外周血细胞免疫功能逐渐下降,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著性差异,提示大肠癌患者免疫状态与TNM分期呈负相关,患者的病期越晚,免疫状态越差,反之,患者的免疫功能越低下,提示病期越晚、预后越差。故患者的免疫状态可间接提示患者预后。
大肠癌患者外周血CD3+、CD4+和CD8+细胞随肿瘤不同阶段出现特征性改变,表明大肠癌患者细胞免疫功能受到抑制。同时也反映了机体抗肿瘤作用。CD4+/CD8+比值随淋巴结转移与否而出现相应的改变,这一定量检测的结果可以对淋巴结转移为判断患者预后指标的评估起辅助作用。同时提示,肿瘤是一种全身性疾病,在肿瘤根治性切除的基础上,应进行包括提高机体免疫的综合治疗。
参考文献
1 Kuss I,Hathway B,Ferris RL,et al.Decreased absolute counts of T lymphocyte subsets and their relation to disease in squamous cell carcinoma of the head and neck.Clin Cancer Res,2004,10(11):3755-3762.
2 石彦,余佩武,雷晓,等.胃癌患者外周血淋巴细胞免疫功能的研究.重庆医学,2004,33(2):229-231.
3 seddiki n,santner-nanan b,martinson j,et al.expression of interleukin (il)-2 and il-7 receptors discriminates between human regulatory and activated t cells.j exp med,2006,203(7):1693-1700.