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丙型肝炎病毒 (Hepatitis C virus,HCV )非结构蛋白 (Nonstructural,NS) 5 A在 HCV基因组复制中的作用目前尚不清楚。本文研究 His- NS5 A对 NS5 B的 RNA依赖性 RNA酶 (Rd RP)活性的影响 ,以了解 NS5 A在HCV RNA复制中的作用。采用变性 -复性方法 ,纯化大肠杆菌表达的重组组氨酸 NS5 A融合蛋白。 GST结合洗脱实验 (GST pull- down assay)研究 NS5 A和 NS5 B是否结合。以不同的摩尔浓度比 ,将纯化的 NS5 B和 NS5 A蛋白混合 ,检测 NS5 A对 NS5 B的 Rd RP活性的影响。获得高得率的纯化 His- NS5 A蛋白。重组 NS5 A蛋白可在体外与NS5 B结合并抑制后者的 Rd RP活性。本研究报道了纯化重组 His- NS5 A蛋白的变性 -复性方法 ,结果显示纯化的重组 NS5 A在体外可与 NS5 B相互结合 ,并明显抑制 NS5 B Rd RP活性。提示了 HCV NS5 A在病毒复制中的可能作用。
The role of 5 A of hepatitis C virus (HCV) non-structural protein (HCV) in the replication of HCV genome is not yet clear. This article investigates the effect of His-NS5A on the RNA-dependent RNase (RdRP) activity of NS5 B in order to understand the role of NS5 A in HCV RNA replication. Recombinant histidine NS5 A fusion protein expressed in Escherichia coli was purified by denaturing-refolding method. GST pull-down assay to study whether NS5 A and NS5 B bind. The purified NS5 B and NS5 A proteins were mixed at different molar concentrations to determine the effect of NS5 A on the Rd RP activity of NS5 B. A high yield of purified His-NS5A protein was obtained. Recombinant NS5 A protein binds NS5 B in vitro and inhibits Rd RP activity of the latter. The present study reports the denaturing-refolding method of purifying recombinant His-NS5A protein. The results show that purified recombinant NS5 A can bind to NS5 B in vitro and inhibit the activity of NS5 B Rd RP. Suggesting the possible role of HCV NS5 A in viral replication.