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目的构建人肿瘤坏死因子rhTNF—α分泌型真核表达载体，并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以pGEM—T／sig—tumstatin为模板，扩增与TNF带重叠区的Ⅳ型胶原信号肽sig基因片段，以PBV220-TNF为模板，扩增与sig带重叠区的TNF基因片段，以上述2个扩增产物片段为模板，重叠区扩增拼接法（SOEing）扩增得到sig—TNF。sig—TNF片段经酶切后，插入经同样酶切的pIRESneo3质粒，利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定，对获得的sig—TNF基因片段及重组载体