信号素3A诱导培养大鼠皮质神经元凋亡与P13K/Akt通路有关

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目的探讨外源性信号素3A(semap3A,Sema3A)对原代培养大鼠皮质神经元凋亡的影响和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide-3-kinase,P13K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(serine/threoninekinase,Akt)通路在Sema3A诱导凋亡中的作用。方法体外培养新生Sprague—Dawley大鼠皮质神经元,并用微管相关蛋白-2免疫荧光染色鉴定。培养大鼠皮质神经元随机分为正常对照组和不同浓度Sema3A(500、1000和2000μ倒)组。CCK8法检测神经元存活率,Hoechst33342染色和TUNEL染色观察神经元凋亡,蛋白质印迹法检测P—Akt、Akt和Bcl-2表达。结果培养的皮质神经元纯度达95%以上。CCK8检测显示,500、1000、2000g/mlSema3A组细胞存活率分别为对照组的(80.9±5.3)%、(67.5±3.9)%和(50.2±4.4)%(F=165.042,P=0.000)。Hoechst33342染色显示,正常对照组及500、1000、2000Sema3A组神经元凋亡率分别为(22.4±1.2)%、(34.0±1.2)%、(39.3±1.4)%和(47.3±2.3)%(F=103.237,P=0.000)。TUNEL染色显示,正常对照组及500、1000、2000Sema3A组神经元凋亡率分别为(23.9±1.1)%、(31.9±1.0)%、(40.14-1.5)%和(51.4±3.4)%(F=103.118,P=0.000)。蛋白质印迹法显示,随着Sema3A浓度的增高,P—Ala(F=15.959,P=0.001)和Bcl-2(F=18.776,P=0.001)表达逐渐下调;而Akt表达无显著改变(F=0.590.P=0.639)。结论Sema3A主要通过诱导神经元凋亡而降低培养皮质神经元存活率,其机制可能与下调P—Akt和Bcl-2表达有关。

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