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目的 通过对人禽流感H5N1毒株核蛋白(NP)基因序列的变异分析,揭示毒株NP基因变异与进化.方法 检测广东地区人禽流感H5N1毒株NP基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株NP基因序列,采用DNAStar5.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株NP基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析.结果 1997-2006 年45株毒株NP基因核苷酸序列同源性分成3类,1997-1998年毒株为第1类,2004-2005 年毒株为第2类,2003年毒株和2006年毒株为第3类;NP基因35个氨基酸位点全部置换,占7.03%(35/498);2003-2006年H5N1毒株通过氨基酸第430位(K430T)位点的置换,增加一个糖基化位点(NGL430-432);GD-01-06毒株第370位发生N370S变异;增加一个糖基化位点(NES368-370).同义变异中,NP基因Ks(同义变异速度)值为2.03×10-5～2.55×10-5 核苷酸/d,Ka(错义变异速度)值为1.58×10-6～3.10×10-6 核苷酸/d,检验发现进化无明显选择性压力存在.结论 1997-1998 年毒株、2004-2005 年毒株、2003年毒株和2006年毒株NP基因核苷酸有差异;2003-2006 年人禽流感H5N1毒株NP基因增加一个糖蛋白位点、GD-01-06毒株再增加一个糖蛋白位点可能改变毒株抗原性.人禽流感H5N1毒株在自然界变异频繁,随着其自然进化,H5N1毒株具有人-人传播能力的概率较大。