目的构建表达人肝细胞生长因子第一结构域（kringle 1 domain of hepatocyle growth factor,HGFK1）基因的重组溶瘤痘苗病毒VG9-HGFK1,并初步检测其对人源宫颈癌细胞（Hela细胞）的杀伤效果。方法将pCB-HGFK1转入大肠埃希菌JM109,挑取单克隆菌落进行测序。以痘苗病毒天坛株广9（VG9）为载体,与pCB-HGFK1质粒共转染HEK 293T/17细胞,在细胞内同源重组,通过筛选表达HGFK1基因的重组溶瘤痘苗病毒VG9-HGFK1,用聚合酶链式反应（PCR）鉴定重组病毒中插入基因HGFK1的表达,用免疫印迹法鉴定VG9-HGFK1感染非洲绿猴肾细胞（BSC-40细胞）内HGFK1基因的表达,并进行药筛、病毒纯化及滴度测定。利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测VG9、VG9-EGFP及VG9-HGFK1对Hela细胞的杀伤效果。结果收集单个菌落,进行测序鉴定,与目标序列一致。HGFK1基因验证,电泳结果显示,在约800 bp处可见条带,HGFK1的大小为818 bp,与电泳结果相一致。重组型TK区验证,仅在2 291 bp处出现条带。免疫印迹结果证实了HGFK1基因的表达。通过滴度测定,VG9-HGFK1滴度为2×107 PFU/ml。MTT结果显示VG9-HGFK1对Hela细胞的杀伤效果高于VG9及VG9-EGFP。结论成功构建了重组溶瘤痘苗病毒VG9-HGFK1,其对Hela细胞有明显的杀伤作用,为后续抗肿瘤实验打下了基础。