【摘 要】
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为了优化在真核细胞中猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白的分泌表达，且构建稳定表达的细胞系，本研究设计合成了9个信号肽引物，通过同源重组的方式得到表达PEDV变异株AH2012/12株S全长蛋白的9个重组表达质粒，瞬时转染HEK 293T细胞后，通过Western-blot验证蛋白外分泌表达水平，结果显示，筛选出的含跨膜蛋白酶丝氨酸信号肽的S蛋白具有较好的外分泌表达特性；利用G418筛选，获得稳定表
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2022YFD1800801）； 江苏省农业科技自主创新资金项目（CX（23）3076）；
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为了优化在真核细胞中猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白的分泌表达，且构建稳定表达的细胞系，本研究设计合成了9个信号肽引物，通过同源重组的方式得到表达PEDV变异株AH2012/12株S全长蛋白的9个重组表达质粒，瞬时转染HEK 293T细胞后，通过Western-blot验证蛋白外分泌表达水平，结果显示，筛选出的含跨膜蛋白酶丝氨酸信号肽的S蛋白具有较好的外分泌表达特性；利用G418筛选，获得稳定表达PEDV S蛋白的单克隆细胞，通过传代验证不同代次的蛋白表达水平，成功构建了可稳定外分泌表达PEDV S的CHO细胞系。结果显示，可在100 mL CHO-PEDV/S细胞培养上清中获得约5 mg的PEDV S蛋白，提高了PEDV S蛋白的表达和分泌，为进一步研制PEDV亚单位疫苗奠定了基础。
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