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【摘 要】 目的：研究黄精对环磷酰胺的增效减毒作用。方法：将肉瘤S180细胞复苏，用生理盐水稀释后接种于小鼠腹腔内行细胞传代培养。7天后于无菌条件下抽取腹水，调配成浓度为1.75×107个瘤细胞/mL的细胞悬液，对40只小鼠进行肿瘤接种造模，每鼠接种0.2 mL于右腋窝下。接种24 h后称重，编号，随机将40只小鼠分为4组，分别为荷瘤组、CTX组、CTX+低剂量黄精组、CTX+高剂量黄精组。造模次日开始给药，共11天，停药次日处死，观察各组小鼠的一般状况，计算抑瘤率，脾、胸腺指数。结果：CTX组、CTX联合低、高剂量黄精对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为40.73%、55.22%、62.95%，CTX联合高剂量黄精组与与单用CTX组抑瘤率显著增高（P<0.05）。CTX组、CTX联合低、高剂量黄精组胸腺指数与荷瘤组相比（P<0.01、P<0.05、P<0.01），CTX联合低、高剂量黄精组与CTX组比较（P<0.05、P<0.01），胸腺指数均显著增高。CTX组、CTX联合低、高剂量黄精组与荷瘤组脾脏指数相比（P<0.01、P<0.05、P<0.05）；CTX联合低、高剂量黄精组与CTX相比（p<0.01），脾脏指数均显著增高。结论：黄精与环磷酰胺联合用药具有增效减毒作用，黄精可减轻CTX对荷瘤小鼠免疫器官的毒性，保护荷瘤小鼠脾脏和胸腺并促其生长，高剂量黄精与CTX联合组优于低剂量黄精联合组。
【关键词】 黄精 环磷酰胺 增效 减毒 抑瘤率 胸腺指数 脾脏指数
【中图分类号】 R289.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）10-0284-02
黃精（Rhizoma polygonati）是临床常用中药材，其味甘、性平，入脾、肾、肺经，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效。Wang和Cai等首次从黄精中分离得到一种甾体皂苷，并发现其在体外试验中对肿瘤细胞有明显的抑制作用，大量体内外实验表明黄精多糖对小鼠H22实体瘤、S180腹水瘤的生长和增殖有显著抑制作用。张峰等研究黄精多糖对H22实体瘤的生长抑制作用和对荷瘤小鼠免疫调节作用，结果发现抑瘤率最高达56.25%。现代药理学研究表明黄精具有抗肿瘤、调节免疫、保护器官、抗氧化等作用。
本研究通过建立S180荷瘤小鼠模型，观察不同剂量的黄精水提液对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠的生活状况，抑瘤率，胸腺、脾脏指的变化，来探讨黄精对抗肿瘤药物的增效减毒作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级昆明小鼠，7-9周龄，雌雄各半，体重19-23 g，购自河北医科大学实验动物中心（合格证号：1003008）。动物在实验前适应性驯养1周。
1.2 瘤株
小鼠S180腹水株由河北大学药学院传代保存。
1.3 黄精水提物的制备
称取黄精（由河北大学附属医院中药房提供，所有药品均经中药专家鉴定）40 g，蒸馏水浸泡2 h后，分别加8倍量、6倍量、4倍量的水煎煮3次，时间分别为药液熬开后60 min、40 min、30 min，将三次煎煮的药液混合，离心，取上清，用旋转蒸发仪低温浓缩至每毫升相当于原生药材1 g的浓度，即得黄精水提取物，即为高剂量的中药（1 g/mL），低剂量的中药加蒸馏水稀释一倍即可。水提物置4℃低温保存备用。
1.4 注射用环磷酰胺腹腔注射液的配制
购自河北大学附属医院，由山西普德药业有限公司生产（批号：20090903），0.2 g/支，临用前以生理盐水倍比稀释至2 mg/mL，放置4℃冰箱避光保存。
1.5 仪器
超级恒温水浴（山东鄄城华鲁仪器有限公司，型号：HH-601），电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司，型号：AE240），超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司， 型号：SW-CJ-2FD），可见分光光度计（精华科技仪器有限公司 ，型号：722），倒置显微镜（南京江南永新光学有限公司），台式低速离心机（北京京立离心机有限公司，型号：LD4-1.8）
1.6 S180瘤源小鼠的复制
将冻存的S180细胞取出，置37℃水浴锅中使融化，以生理盐水洗涤一次，然后低速离心，弃上清液，再用生理盐水稀释后，取0.5mL注入小鼠腹腔内。
1.7 肿瘤接种造模
S180细胞培养7天后，选择精神状态好，腹水饱满的小鼠断颈处死，于无菌条件下消毒鼠腹，抽取癌性腹水，按1：3比例用生理盐水稀释，吹吸均匀，再以3000转离心5 min，弃上清液，再加入生理盐水调配成浓度为1.75×107个瘤细胞/mL的细胞悬液。每鼠接种0.2 mL（约含3.5×106个瘤细胞）于右腋窝下。
1.8 实验动物分组
小鼠接种瘤细胞24 h后，称重、编号，按巡回顺序法随机分4组，每组10只，各组小鼠用3%苦味酸标记，自由摄取饲料，量不限，自由饮用蒸馏水。
1.9 实验动物的给药方法
⑴荷瘤组：生理盐水0.4 mL灌胃，同时约5小时后腹腔注射生理盐水0.2 mL ，1天1次，共11天；⑵ CTX组：生理盐水0.4 mL灌胃，同时5小时后腹腔注射CTX 0.1 mL/10g（20 mg/kg）， l天1次，共11天；⑶黄精低剂量组：低剂量（10 g/kg） 黄精0.2 mL/10 g灌胃，同时约5小时后腹腔注射CTX0.1 mL/10 g（20 mg/kg）， l天1次，共11天；⑷黄精高剂量组：高剂量（20 g/kg）黄精0.2 mL/10 g灌胃，同时约5小时后腹腔注射CTX0.1 mL/10 g（20 mg/kg），l天1次，共11天。
1.10 检测指标及其方法
⑴瘤重和抑瘤率 在第12天，将小鼠眼球摘除取血后断颈处死，依次用碘酊酒精消毒操作部位皮肤，于超净工作台上，以无菌操作从腋部皮下完整剥取肿瘤组织，剥离干净后于电子天平称瘤体质量并计算抑瘤率。
肿瘤抑制率（%）=（荷瘤组平均瘤重-各给药组平均瘤重）/荷瘤组平均瘤重
⑵肝、肾、脾、胸腺指数的测定
剥离其肝、肾、脾、胸腺，用电子分析天平称重，按公式计算各脏器指数。
脏器指数=脏器重（mg）/鼠重（g）
1.11 统计方法
各组数据以均数±标准差（ ）表示，采用SPSS17.0统计软件进行分析，多组间比较用One-Way ANOVA方差分析。
2 实验结果
2.1 黄精对化疗小鼠肿瘤生长的影响
如表1所示：CTX联合高剂量黄精组与单用CTX組抑瘤率显著增高（P<0.05）。
2.2 黄精对化疗小鼠免疫器官的影响
由表2可见：CTX组、CTX联合低、高剂量黄精组胸腺指数与荷瘤组相比（P<0.01、P<0.05、P<0.01），CTX联合低、高剂量黄精组与CTX组比较（P<0.05、P<0.01），均显著增高。CTX组、CTX联合低、高剂量黄精组与荷瘤组脾脏指数相比（P<0.01、P<0.05、P<0.05）；CTX联合低、高剂量黄精组与CTX相比（p<0.01），均显著增高。
3 讨论
实验结果显示，与荷瘤组相比，CTX组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均显著降低，表明CTX可致免疫器官萎缩，对小鼠的免疫功能具有抑制作用。与CTX组相比，黄精高、低剂量组胸腺指数和脾脏指数均显著升高，表明黄精对CTX所致的免疫器官的萎缩具有一定的保护作用。
4 结论
黄精与环磷酰胺合用对治疗肿瘤具有协同抑制作用，黄精可抑制荷瘤小鼠的移植性肿瘤的生长，与化疗药物环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效作用，可减轻CTX对化疗小鼠免疫器官的毒性作用，保护荷瘤小鼠的脾脏和胸腺并促进其生长，这为黄精应用于临床或作为化疗后辅助用药提供了一定实验依据。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）.北京： 中国医药科技出版社， 2010： 288.
[2]江华.黄精多糖的抗肿瘤活性研究[J].南京中医药大学学报， 2010， 26（6）：479～480.
[3]叶红翠，张小平，余红，等.多花黄精粗多糖抗肿瘤活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（6）：34～36.
[4]张峰，高群，孔令雷，等.黄精多糖抗肿瘤作用的实验研究[J].中国实用医药杂志，2007，2（21）：95～96.
[5]陆建平，张静，张艳贞.黄精多糖的功能活性及应用前景[J].食品安全质量检测学报， 2013，4（1）：273～278.
作者简介：.冯伟：主管药师，在读硕士研究生；2.张翠欣：本文通讯作者，主任药师，医学博士，硕士研究生导师。
【关键词】 黄精 环磷酰胺 增效 减毒 抑瘤率 胸腺指数 脾脏指数
【中图分类号】 R289.5 【文献标识码】 A 【文章编号】 1671-5160（2014）10-0284-02
黃精（Rhizoma polygonati）是临床常用中药材，其味甘、性平，入脾、肾、肺经，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效。Wang和Cai等首次从黄精中分离得到一种甾体皂苷，并发现其在体外试验中对肿瘤细胞有明显的抑制作用，大量体内外实验表明黄精多糖对小鼠H22实体瘤、S180腹水瘤的生长和增殖有显著抑制作用。张峰等研究黄精多糖对H22实体瘤的生长抑制作用和对荷瘤小鼠免疫调节作用，结果发现抑瘤率最高达56.25%。现代药理学研究表明黄精具有抗肿瘤、调节免疫、保护器官、抗氧化等作用。
本研究通过建立S180荷瘤小鼠模型，观察不同剂量的黄精水提液对环磷酰胺化疗荷瘤小鼠的生活状况，抑瘤率，胸腺、脾脏指的变化，来探讨黄精对抗肿瘤药物的增效减毒作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
清洁级昆明小鼠，7-9周龄，雌雄各半，体重19-23 g，购自河北医科大学实验动物中心（合格证号：1003008）。动物在实验前适应性驯养1周。
1.2 瘤株
小鼠S180腹水株由河北大学药学院传代保存。
1.3 黄精水提物的制备
称取黄精（由河北大学附属医院中药房提供，所有药品均经中药专家鉴定）40 g，蒸馏水浸泡2 h后，分别加8倍量、6倍量、4倍量的水煎煮3次，时间分别为药液熬开后60 min、40 min、30 min，将三次煎煮的药液混合，离心，取上清，用旋转蒸发仪低温浓缩至每毫升相当于原生药材1 g的浓度，即得黄精水提取物，即为高剂量的中药（1 g/mL），低剂量的中药加蒸馏水稀释一倍即可。水提物置4℃低温保存备用。
1.4 注射用环磷酰胺腹腔注射液的配制
购自河北大学附属医院，由山西普德药业有限公司生产（批号：20090903），0.2 g/支，临用前以生理盐水倍比稀释至2 mg/mL，放置4℃冰箱避光保存。
1.5 仪器
超级恒温水浴（山东鄄城华鲁仪器有限公司，型号：HH-601），电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司，型号：AE240），超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司， 型号：SW-CJ-2FD），可见分光光度计（精华科技仪器有限公司 ，型号：722），倒置显微镜（南京江南永新光学有限公司），台式低速离心机（北京京立离心机有限公司，型号：LD4-1.8）
1.6 S180瘤源小鼠的复制
将冻存的S180细胞取出，置37℃水浴锅中使融化，以生理盐水洗涤一次，然后低速离心，弃上清液，再用生理盐水稀释后，取0.5mL注入小鼠腹腔内。
1.7 肿瘤接种造模
S180细胞培养7天后，选择精神状态好，腹水饱满的小鼠断颈处死，于无菌条件下消毒鼠腹，抽取癌性腹水，按1：3比例用生理盐水稀释，吹吸均匀，再以3000转离心5 min，弃上清液，再加入生理盐水调配成浓度为1.75×107个瘤细胞/mL的细胞悬液。每鼠接种0.2 mL（约含3.5×106个瘤细胞）于右腋窝下。
1.8 实验动物分组
小鼠接种瘤细胞24 h后，称重、编号，按巡回顺序法随机分4组，每组10只，各组小鼠用3%苦味酸标记，自由摄取饲料，量不限，自由饮用蒸馏水。
1.9 实验动物的给药方法
⑴荷瘤组：生理盐水0.4 mL灌胃，同时约5小时后腹腔注射生理盐水0.2 mL ，1天1次，共11天；⑵ CTX组：生理盐水0.4 mL灌胃，同时5小时后腹腔注射CTX 0.1 mL/10g（20 mg/kg）， l天1次，共11天；⑶黄精低剂量组：低剂量（10 g/kg） 黄精0.2 mL/10 g灌胃，同时约5小时后腹腔注射CTX0.1 mL/10 g（20 mg/kg）， l天1次，共11天；⑷黄精高剂量组：高剂量（20 g/kg）黄精0.2 mL/10 g灌胃，同时约5小时后腹腔注射CTX0.1 mL/10 g（20 mg/kg），l天1次，共11天。
1.10 检测指标及其方法
⑴瘤重和抑瘤率 在第12天，将小鼠眼球摘除取血后断颈处死，依次用碘酊酒精消毒操作部位皮肤，于超净工作台上，以无菌操作从腋部皮下完整剥取肿瘤组织，剥离干净后于电子天平称瘤体质量并计算抑瘤率。
肿瘤抑制率（%）=（荷瘤组平均瘤重-各给药组平均瘤重）/荷瘤组平均瘤重
⑵肝、肾、脾、胸腺指数的测定
剥离其肝、肾、脾、胸腺，用电子分析天平称重，按公式计算各脏器指数。
脏器指数=脏器重（mg）/鼠重（g）
1.11 统计方法
各组数据以均数±标准差（ ）表示，采用SPSS17.0统计软件进行分析，多组间比较用One-Way ANOVA方差分析。
2 实验结果
2.1 黄精对化疗小鼠肿瘤生长的影响
如表1所示：CTX联合高剂量黄精组与单用CTX組抑瘤率显著增高（P<0.05）。
2.2 黄精对化疗小鼠免疫器官的影响
由表2可见：CTX组、CTX联合低、高剂量黄精组胸腺指数与荷瘤组相比（P<0.01、P<0.05、P<0.01），CTX联合低、高剂量黄精组与CTX组比较（P<0.05、P<0.01），均显著增高。CTX组、CTX联合低、高剂量黄精组与荷瘤组脾脏指数相比（P<0.01、P<0.05、P<0.05）；CTX联合低、高剂量黄精组与CTX相比（p<0.01），均显著增高。
3 讨论
实验结果显示，与荷瘤组相比，CTX组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均显著降低，表明CTX可致免疫器官萎缩，对小鼠的免疫功能具有抑制作用。与CTX组相比，黄精高、低剂量组胸腺指数和脾脏指数均显著升高，表明黄精对CTX所致的免疫器官的萎缩具有一定的保护作用。
4 结论
黄精与环磷酰胺合用对治疗肿瘤具有协同抑制作用，黄精可抑制荷瘤小鼠的移植性肿瘤的生长，与化疗药物环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效作用，可减轻CTX对化疗小鼠免疫器官的毒性作用，保护荷瘤小鼠的脾脏和胸腺并促进其生长，这为黄精应用于临床或作为化疗后辅助用药提供了一定实验依据。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）.北京： 中国医药科技出版社， 2010： 288.
[2]江华.黄精多糖的抗肿瘤活性研究[J].南京中医药大学学报， 2010， 26（6）：479～480.
[3]叶红翠，张小平，余红，等.多花黄精粗多糖抗肿瘤活性研究[J].中国实验方剂学杂志，2008，14（6）：34～36.
[4]张峰，高群，孔令雷，等.黄精多糖抗肿瘤作用的实验研究[J].中国实用医药杂志，2007，2（21）：95～96.
[5]陆建平，张静，张艳贞.黄精多糖的功能活性及应用前景[J].食品安全质量检测学报， 2013，4（1）：273～278.
作者简介：.冯伟：主管药师，在读硕士研究生；2.张翠欣：本文通讯作者，主任药师，医学博士，硕士研究生导师。