【摘 要】
：
目的 探究低载量HBV DNA S区基因扩增的可行性并对实验条件进行优化,为隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV DNA S区基因突变检测提供依据.方法 采用传统巢式PCR和自建两轮PCR方法扩增6例低HBV DNA载量(100～200 IU/mL)和22例更低HBV DNA载量(20～99 IU/mL)的血清样本中HBV DNA S区基因,并对引物序列、引物量、PCR产物模板稀释倍数、退火温度、PCR反应循环数、PCR总反应体系等条件进行优化.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,切割目的条带凝胶进行克隆测
【机 构】
：
上海中医药大学附属第七人民医院检验科,上海200137
论文部分内容阅读
目的 探究低载量HBV DNA S区基因扩增的可行性并对实验条件进行优化,为隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV DNA S区基因突变检测提供依据.方法 采用传统巢式PCR和自建两轮PCR方法扩增6例低HBV DNA载量(100～200 IU/mL)和22例更低HBV DNA载量(20～99 IU/mL)的血清样本中HBV DNA S区基因,并对引物序列、引物量、PCR产物模板稀释倍数、退火温度、PCR反应循环数、PCR总反应体系等条件进行优化.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,切割目的条带凝胶进行克隆测序,然后对克隆测序结果进行核酸序列BLAST比对确认.结果 设计3对巢式PCR引物(P1～P3),扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因.经过PCR扩增条件优化后,6例低HBV DNA载量的血清样本中仅2例经巢式PCR扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,22例更低HBV DNA载量样本无一例扩增成功.自建两轮PCR法设计了P4～P15共12对引物,扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因.经过PCR扩增条件优化并筛选出P13为最佳引物后,6例低HBV DNA载量的血清样本全部扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列;15例(15/22,68.18％)更低HBV DNA载量的样本扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,经PCR产物克隆测序均证实为HBV DNA S区基因,该15例样本中HBV DNA载量最低为20.1 IU/mL.结论 基于引物P13自建的两轮PCR法更适用于低载量HBV DNA S区基因的扩增,扩增效率和特异性均优于传统巢式PCR;扩增产物可进一步应用于OBI者HBV DNA S区基因序列突变分析.
其他文献
目的 观察厚朴通闭汤口服联合吡柔比星膀胱灌注化学治疗对非肌层浸润性膀胱癌术后患者的疗效.方法 选择2018年1月至2019年12月于上海交通大学附属第一人民医院行经尿道膀胱肿瘤切除术治疗的非肌层浸润性膀胱癌患者95例,随机分为观察组(49例)和对照组(46例),对照组术后采用吡柔比星膀胱灌注化学治疗,观察组在对照组基础上辅以厚朴通闭汤口服,总疗程均为1年.所有患者术后均随访1年,比较两组患者的膀胱癌复发情况、中医证候改善情况、生活质量、尿常规指标、血常规指标、肝肾功能指标、不良反应发生情况等.结果 术后经
目的:探讨经皮内镜下胃造口术(PEG)对于肌萎缩侧索硬化(ALS)伴有吞咽困难病人的安全性和有效性.方法:回顾性分析46例行PEG的ALS伴有吞咽困难病人的临床资料,分析PEG置管时间、成功率、并发症及处理方法.结果:本研究纳入了46例病人,男30例,女16例.平均置管时间为(8.8±1.6)min,成功率为100％,未发生置管相关并发症,置管后并发症的发生率为17.39％(8/46),包括造口感染2例,造口管堵塞2例,肺炎2例,造口管近腹壁处折断1例,造口渗漏1例.术后30 d死亡1例,死亡率为2.17
Krabbe病(Krabbe disease,KD)又称球形细胞脑白质营养不良,是一种由半乳糖脑苷酯酶(galac-tocerebrosidase,GALC)缺乏导致的罕见常染色体隐性遗传溶酶体贮积病[1].GALC缺乏可引起半乳糖脑苷酯蓄积,造成中枢和周围神经广泛的髓鞘脱失、星形胶质细胞增生及大量球形细胞浸润进而引起一系列的临床表现.婴儿型KD通常表现包括易激惹、喂养困难、轴向张力过低、发育倒退、肢体痉挛等[2].最终出现抽搐,而且在光、声音或触摸刺激时出现强直性伸肌痉挛,大多数在2岁前死亡.
目的:探讨围放疗期全程营养管理在腹部肿瘤领域的应用及对营养现状、T细胞亚群、Kamofsky功能状态(KPS)评分的影响.方法:选取2019年1月至2020年7月本院收治的152例腹部肿瘤放疗病人进行前瞻性研究,随机数字表法分为对照组、观察组,各76例.对照组给予常规营养指导,观察组在此基础上给予围放疗期全程营养管理.比较两组营养现状[血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(Alb)、前白蛋白(PAB)]、细胞免疫功能(CD4+、CD4+/CD8+、总B淋巴细胞、NK细胞、总T淋巴细胞)、KPS评分、患者主观整体评
癌症管理涉及疾病诊疗的全过程,包括早期检测、肿瘤诊断、测定肿瘤边缘、跟踪肿瘤演变、预测肿瘤复发及评估患者转归等.病理学作为一门探索疾病病因、发病机制、形态结构、功能和代谢等的传统学科,是肿瘤诊断的金标准,参与了癌症管理的整个过程.人工智能在病理学中的应用为癌症管理提供了强有力的工具,病理人工智能在疾病诊断/辅助诊断、精准医疗和生命探索中都将起到重要作用.
目的:评估南京地区肠内营养(EN)药的临床应用现状及趋势,为临床用药提供参考依据.方法:对2017～ 2019年南京地区EN药的销售金额、用药频度、限定日费用等进行统计,并结合线性回归分析趋势.结果:2017～ 2019年南京地区39家医院EN药的销售金额、用药频度呈逐年增长趋势,2019年销售金额达14508.7万元;用药频度排名前5位分别为安素、百普力、能全素、能全力、瑞代;各药的限定日费用逐年递减,其中安素连续三年最低;安素、能全素、瑞素、瑞先、能全力等的排序比值＞1,性价比高;此外,医院数统计显示
外科医师在甲状腺病变手术中常使用快速冷冻切片获得术中病理诊断,指导甲状腺手术方式及确定手术范围[1].甲状腺组织的血供及细胞极为丰富且常伴有囊肿,又由于其滤泡腔内含有黏液样胶质,这些因素在组织速冻(-25～-20 ℃)的条件下极易影响冷冻切片的制片质量,进而影响术中病理诊断的时限性及准确性.甲状腺组织的速冻与回暖方法目前尚无统一的标准,相关研究也较少.本研究通过比较不同速冻与回暖方法处理的甲状腺组织冷冻切片制片质量的差异,旨在寻找一种较佳的甲状腺组织速冻与回暖方法,以更好地为其术中病理诊断与临床手术服务.
潜水实践中,如果潜水员罹患潜水相关疾病,但现场既无加压舱也没有条件后送至有效救治机构进行治疗时,在设备条件和技术条件允许的情况下可进行水下加压治疗.但是,并不是所有潜水相关疾病都需要进行水下加压治疗,也不是所有的情况下都适合进行水下加压治疗.同时,水下加压治疗存在着一定的风险.潜水作业现场,患病潜水员选择水下加压治疗时需综合考虑多方面因素后做出选择.本文对选择水下加压治疗的条件及水下加压治疗存在的风险、治疗方案和实施要求进行简要总结.
目的 调查某岛礁作业人员航行期间运动病的发病情况和治疗效果,为指导部队开展运动病管理与防控提供数据支持.方法 选择某岛礁驻防的相关人员中上岛时间、出海次数、乘坐舰艇、经历海况与居住条件均相同的132名作业人员为调查对象.通过问卷调查收集基本信息、晕船程度及伴随症状、治疗史、进食和睡眠情况,并分析与晕船相关的因素.结果 共发放问卷132份,收回有效问卷132份.132名调查对象中,女24人、男108人,6人(4.55％)出海前接受过防止晕船的前庭功能训练.航行期间16人(12.12％)无晕船症状,116人(