目的 探讨B、C基因型HBVx蛋白(HBx)对肝癌细胞凋亡的影响 方法 采用PCR法扩增B、C基因型HBV X基因片段,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体构建重组体pGFP-XB及pGFP-XC;使用FugeneHD将载体pEGFP-C1、pGFP-XB及pGFP-XC转染Bel-7402细胞,RT-PCR及Western Blot鉴定HBV X基因的转录与表达,以建立稳定表达细胞株Bel-7402/GFP、Bel-7402/GFP-XB、Bel-7402/GFP-XC,用阿霉素(2.5 μg/ml)分别处理上述细胞,处理后用锥虫蓝染色法和流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果 RT-PCR及Western Blot检测显示在Bel-7402/GFP-XB、Bel-7402/GFP-XC有HBV X基因转录与表达.锥虫蓝染色检测表明阿霉素处理的Bel-7402、Bel-7402/GFP细胞发生了明显的时间依赖性死亡,而在Bel-7402/GFP-XB、Bel-7402/GFP-XC和未加阿霉素处理的空白对照组细胞未见明显细胞死亡；流式细胞术检测显示阿霉素处理48 h后,Bel-7402/GFP-XB、Bel-7402/GFP-XC细胞的凋亡率分别为3.87％、4.01％,两者差异无统计学意义(P＞0.05),且与未处理的空白对照组细胞凋亡率(2.74％、2.91％、3.00％、2.83％)差异无统计学意义(P＞0.05),但明显低于加入阿霉素处理的Bel-7402细胞(27.05％)及Bel-7402/GFP细胞(29.14％)(P＜0.01).结论 成功建立了稳定表达B、C基因型HBV X与GFP融合蛋白的人肝癌细胞系,为进一步研究HBV X的生物学功能提供了基础.在人肝癌细胞,B、C基因型HBV X蛋白均能抑制阿霉素诱导的细胞凋亡,其抑制细胞凋亡的作用无明显差异。
B、C基因型乙型肝炎病毒X蛋白调控细胞凋亡的比较研究
【摘 要】
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目的 探讨B、C基因型HBVx蛋白(HBx)对肝癌细胞凋亡的影响 方法 采用PCR法扩增B、C基因型HBV X基因片段,并定向插入绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体构建重组体pGFP-XB及pGFP-XC;使用FugeneHD将载体pEGFP-C1、pGFP-XB及pGFP-XC转染Bel-7402细胞,RT-PCR及Western Blot鉴定HBV X基因的转录与表达,以建立稳定表达细胞株Be
【机 构】
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511400广州,番禺中心医院,中山大学附属第三医院,中山大学附属第三医院
【出 处】
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中华实验和临床病毒学杂志
【发表日期】
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2013年27期
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