启动子是一段位于结构基因5’端上游的DNA序列，能够活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确结合并起始转录。目前，植物启动子已经被大量的分离并研究。但是还未见紫花苜蓿启动子研究的相关报道。本研究以紫花苜蓿中苜1号为材料，研究编码锌指蛋白转录因子基因的启动子，旨在阐明该启动子不同区域发挥的功能，及其响应的诱导条件。主要试验结果如下：1.克隆长1272bp的MsZFN基因启动子，命名为MsZPP（登录号：FJ161979.2）。研究确定了转录起始位点位于翻译起始位点上游69bp处。生物信息学分析预测，这段序列存在TATA-box和多个CAAT-box。此外，该序列存在多个光响应作用元件，激素响应作用元件，以及一些响应生物或非生物胁迫诱导的作用元件。2.构建缺失启动子及全长启动子表达载体，并采用农杆菌介导法转化烟草。成功获得阳性转化再生烟草植株TP1、TP2、TP3、TP4、TP5和TP6，为后续研究启动子功能提供试验材料。3.经过转化植株GUS蛋白组织化学染色及GUS酶活性定量分析，结果表明：不同长度的启动子片段调控功能存在差别。除种子外，转化植株根，茎，叶，花中都可以检测到gus基因的表达，并且随着启动子长度增加，GUS酶活性也相应增强。TP1、TP2与TP3、TP4、TP5和TP6相比，调控gus基因表达能力较弱。启动子长度为623bp时，就能够有效调控下游基因表达，所以该启动子的核心区域约为623bp。长度为460bp的启动子可以调控gus基因在气孔保卫细胞表达，初步说明在该区域存在能够特异性定位基因表达的顺式作用元件。4.测定不同诱导条件下各种转化植株的GUS酶活性，结果表明：黑暗处理后，GUS酶活性显著增加，但不同缺失启动子之间差异不显著。200μM·L^-1MeJA处理后，只有转化植株TP6的GUS酶活性显著增加，是对照的2.96倍，其他差异不显著。2.85μM·L^-1IAA处理后，启动子长度大于460bp的转化植株GUS酶活性是对照的1.8倍左右，小于460bp的转化植株与对照相比没有明显变化。在70μM·L^-1GA3、50μM·L^-1ABA、25μM·L^-1PEG6000以及50mM·L^-1NaCl处理条件下，转化植株中GUS酶活性与对照相比没有显著差异。由此表明，启动子MsZPP可以应答黑暗、IAA及MeJA的诱导，但不响应另外四种诱导。5.克隆MsZFN基因上游1340bp的片段，其中包括基因5’非编码区与全长启动子，构建表达载体，并成功转化烟草。与含有全长启动子的阳性转化植株比较，结果发现，两者在组织特异性表达和GUS酶活性分析上没有差别。由此可知，MsZFN基因的5’-UTR对启动子在转录调控水平没有影响。