黄芪汤改善糖尿病肾病及对AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路的影响

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目的:  研究黄芪汤对糖尿病肾病的治疗作用,同时探讨黄芪汤治疗糖尿病肾病的可能机制。  方法:  体内实验研究:将40只6周龄db/db小鼠,随机分为模型组,黄芪汤高、中、低剂量组。分别给予0.5%羧甲基纤维素钠和黄芪汤1.08g/kg、0.36g/kg、0.12g/kg灌胃,1次/d。15只6周龄的db/m小鼠随机分为db/m对照组(7只)和db/m黄芪汤高剂量组(8只)分别给予0.5%羧甲基纤维素钠和1.08g/kg黄芪汤灌胃,1次/d。每4周检测一次各组小鼠的体质量,连续灌胃14周后,20周龄时进行生化指标、肾组织病理学检测,通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组肾皮质中AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路相关蛋白的表达量。  体外实验研究:以高糖刺激足细胞为模型,黄芪汤进行干预。采用CCK8检测高糖状态下黄芪汤对足细胞存活率的影响。通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组足细胞胰岛素刺激前后AMPK、p-AMPK、Camkkβ、p-Camkkβ、LKB1、p-LKB1、ACC、p-ACC蛋白的表达量。  结果:  1.体内实验研究结果:与db/db模型组比较,黄芪汤可浓度依赖性的降低db/db小鼠的体重、肾重,血糖、尿蛋白、降低血清甘油三酯、胆固醇、血清低密度脂蛋白浓度,降低血清ALT、AST浓度,升高肾重/体重指数,改善肾脏病理情况,可浓度依赖性的上调肾皮质p-AMPK、p-Camkkβ、p-LKB1、p-ACC蛋白表达水平。  2.体外实验研究结果:黄芪汤浓度依赖性的改善高糖刺激下足细胞的活性,并改善高糖刺激下足细胞胰岛素的抵抗作用,可浓度依赖性的上调高糖刺激下足细胞中p-AMPK、p-Camkkβ、p-LKB1、p-ACC蛋白表达水平,从而激活Ⅱ型糖尿病肾病诱导的AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路下调。  结论:  1.黄芪汤可剂量依赖性的降低db/db小鼠的体重、肾重、血糖、尿蛋白、血清甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白浓度、谷氨酸转氨酶和谷草转氨酶浓度,升高肾重/体重指数,改善肾脏病理损伤情况。  2.黄芪汤能明显改善高糖刺激下足细胞活性,并随着剂量的增加,足细胞活性增加。  3.黄芪汤可能是通过激活AMPK-Camkkβ(LKB1)信号通路起到改善糖尿病肾病的作用。
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