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目的1、研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,初步探讨其可能作用机制。2、联合自噬抑制剂3-MA预处理后,进一步观察Res对肝癌HepG2细胞凋亡、自噬的影响,以明确自噬对Res抗肝癌作用的影响。3、根据实验结果分析Res作为中药虎杖提取物,发挥抗肝癌作用的具体机制,以深入探讨中药虎杖在肝癌治疗中的作用和可行性。方法1、CCK-8法检测不同浓度Res作用于肝癌HepG2细胞24h、48h、72h后细胞增殖抑制率的变化;同时,联合自噬抑制剂3-MA预处理后,进一步检测不同浓度及不同作用时间下Res对HepG2细胞增殖的抑制作用;2、48h作用时间下,流式细胞术检测不同浓度Res对细胞周期及凋亡的影响,以及联合自噬抑制剂3-MA预处理后对细胞凋亡的影响;3、MDC(Dansylcadaverine,单丹磺酰尸胺)染色后,荧光显微镜下观察Res对细胞自噬的影响;4、实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测不同浓度Res以及联合自噬抑制剂3-MA预处理后,对肝癌HepG2细胞中Beclin1、Bcl-2、BTG2 m MRN表达的影响;5、蛋白印迹法(Western blot,WB)检测不同浓度Res以及联合自噬抑制剂3-MA预处理后,对肝癌HepG2细胞中Beclin1、Bcl-2、BTG2蛋白表达的影响。结果1、CCK-8实验结果显示,随着Res作用浓度的增加及作用时间的延长,肝癌HepG2细胞的增殖抑制率逐渐增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);流式细胞术结果显示,Res干预HepG2细胞48h后,随着浓度的增加,G2/M期比例以及总细胞凋亡率均上升,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR及WB实验观察到,Beclin1、BTG2 m MRN和蛋白的表达随着Res作用浓度的递增而逐渐升高,Bcl-2 m MRN和蛋白的表达随着Res作用浓度的递增而逐渐降低,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。2、联合自噬抑制剂3-MA预处理后,Res对肝癌HepG2细胞的增殖抑制率仍呈时间和浓度依赖性的增加,但是与对应浓度的Res实验组相比,细胞增殖抑制率较前不同程度的下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,Res促进细胞凋亡的作用也较前减弱,差异具有统计学意义(P<0.01)。MDC染色结果显示Res干预后细胞中MDC绿色荧光基团数目增多,联合3-MA处理后绿色荧光基团数目明显减少,而对照组和3-MA组荧光强度弱且点状结构很少。RT-PCR及WB实验观察到,联合3-MA预处理后,Beclin1、BTG2 m MRN和蛋白的表达较前减少,Bcl-2 m MRN和蛋白的表达较前增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论1、Res可以抑制肝癌HepG2细胞增殖,促进其凋亡以及引起细胞周期阻滞,且具有浓度依赖性;2、联合自噬抑制剂3-MA预处理后,Res抑制HepG2细胞增殖的作用被部分逆转,提示该作用可能是自噬依赖性的,其机制可能与作用于BTG2-Bcl-2/Beclin1自噬信号通路有关;3、从分子机制水平证实了Res可以发挥抗肝癌作用,为中药虎杖临床应用于肝癌治疗提供了理论依据。