【摘 要】
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百香果（Passiflora caerulea L.）是我国南方地区一种重要的热带水果。近年来百香果种植面积不断增加,但病毒病引起的果实品质降低和产量减少,制约着百香果产业的健康发展,亟需建立病毒快速检测方法和有效的苗木脱毒体系。本文以贵州省镇宁县、贞丰县、罗甸县和关岭县等主产区的百香果为供试材料,探索病毒鉴定、RT-PCR检测以及脱毒培养体系,建立简便易行的百香果茎尖脱毒培养体系。其结果可为生产
【基金项目】
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百香果冬季苗木快速繁育技术研究及应用（贵州省科技支撑计划, 合同编号:黔科合支撑[2017]2570-1）；
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百香果（Passiflora caerulea L.）是我国南方地区一种重要的热带水果。近年来百香果种植面积不断增加,但病毒病引起的果实品质降低和产量减少,制约着百香果产业的健康发展,亟需建立病毒快速检测方法和有效的苗木脱毒体系。本文以贵州省镇宁县、贞丰县、罗甸县和关岭县等主产区的百香果为供试材料,探索病毒鉴定、RT-PCR检测以及脱毒培养体系,建立简便易行的百香果茎尖脱毒培养体系。其结果可为生产上百香果脱毒种苗提供一定的理论依据。主要研究结果如下:1.利用高通量测序技术和生物学信息分析对4个主产区内疑似病毒侵染的百香果叶片进行病毒种类鉴定。其中EAPV（East Asian Passiflora virus）最高,占所有病毒序列的比例为63.65%;其次是PLV（Passiflora latent virus）,占比为34.72%;最后是Te MV（Telosma mosaic virus）,占比为1.59%。并对目的条带进行测序及序列分析,Te MV、EAPV和PLV贵州分离物与已报道分离物的核苷酸序列一致性为87.6%～99.7%、85.2%～99.8%和93.0%～95.4%。2.运用RT-PCR法对105份样品进行病毒检测及建立多重RT-PCR反应体系。Te MV在4个主产区的检出率为100%;在镇宁县、贞丰县和罗甸县的EAPV和PLV平均检出率达80%;关岭县的PLV检出率低至20%,而EAPV无检出。优化后的多重RT-PCR反应体系为:上下游引物（10μmol/L）为0.5μL,最佳退火温度为50℃。3.对百香果脱毒培养体系中的消毒方法和培养基配方进行优化。最佳消毒方法为:75%酒精消毒30 s,再用0.1%Hg Cl2溶液消毒15 min,污染率低至9%,成活率可达85%。最佳诱导培养基配方为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,p H=5.9,诱导率达89%。最佳增殖培养基配方为:MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,p H=5.9,增殖系数可达9.4。最佳生根培养基配方为:1/2 MS+0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂粉,p H=5.9,根系生长健壮,诱导率达90%。4.对百香果茎尖脱毒组培苗进行脱毒效果评价。应用RT-PCR法对9株组培苗进行病毒检测,可以脱除8株组培苗的EAPV和4株组培苗的Te MV,未能脱除PLV。
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