研究目的：观察降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide, CGRP)和孤啡肽(orphaninFQ, OFQ)对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能和室性心律失常的影响。目的在于比较和探讨CGRP和OFQ在急性心肌缺血再灌注病理生理中对心脏功能和心律失常的影响,从而进一步探讨神经源性机制在急性心肌缺血再灌注损伤中的作用机制。研究背景：急性心肌缺血是由于冠状动脉循环改变引起冠状血流及心肌需求之间的不平衡而导致的心肌损害。心肌缺血性疾患已成为人类健康的主要杀手。急性心肌缺血可以产生心肌损伤并诱发心律失常,严重的心律失常已成为急性心肌缺血病人的主要死因。已有的相关研究表明,CGRP和OFQ参与机体对心血管系统的调节。在发生急性心肌缺血时,心肌组织内上述活性物质的含量均有所增加,提示CGRP和OFQ参与并影响急性心肌缺血的病理变化过程。目前其在器官水平对心脏功能的调节作用及其作用机制还不明确。研究内容及方法：第一章：CGRP对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能及室性心律失常的影响采用体重为250-280g的健康雄性SD大鼠。建立Langendorff离体心脏缺血再灌注实验模型,实验研究分三部分：1.观察在大鼠离体心脏缺血再灌注之前预先给予不同浓度降钙素基因相关肽(CGRP) (10-6 mol·L-1, 10-7 mol·L-1,10-8mol·L-1)对再灌注之后大鼠心脏功能及室性心律失常的影响并观察联合使用CGRP(10-7 mol·L-1)和降钙素基因相关肽受体拮抗剂CGRP8-37 (10-6 mol·L-1)对CGRP (10-7 mol·L-1)诱发的心脏功能及室性心律失常改变的影响。2.观察在大鼠离体心脏缺血再灌注之后给予CGRP (10-7 mol·L-1))对再灌注之后大鼠心脏功能及室性心律失常的影响并观察联合使用CGRP (10-7 mol·L-1)和CGRP8-37 (10-6 mol·L-1)对CGRP (10-7 mol·L-1)诱发的心脏功能及室性心律失常改变的影响。3.观察在大鼠离体心脏缺血再灌注之前和再灌注之后分别给予CGRP (10-7 mol·L-1)对再灌注之后大鼠心脏功能及室性心律失常改变的差别。第二章：OFQ对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能及室性心律失常改变的影响建立Langendorff离体心脏缺血再灌注实验模型,实验研究分三部分：1.观察在大鼠离体心脏缺血再灌注之前给予不同浓度孤啡肽(OFQ)(10-6mol·L-1,10-7 mol·L-1)对再灌注之后大鼠心脏功能及室性心律失常的影响并观察联合使用OFQ(10-6 mol·L-1)和孤啡肽受体拮抗剂UFP-101 (10-5 mol·L-1)对OFQ(10-6mol·L-1)诱发的心脏功能及室性心律失常改变的影响。2.观察在大鼠离体心脏缺血再灌注之后给予OFQ (10-6 mol·L-1))对再灌注之后大鼠心脏功能及室性心律失常的影响并观察联合使用OFQ (10-6 mol·L-1)和UFP-101 (10-5 mol·L-1)对OFQ (10-6 mol·L-1)诱发的心脏功能及室性心律失常改变的影响。3.观察在大鼠离体心脏缺血再灌注之前和再灌注之后分别给予OFQ(10-6mol-L·1)对再灌注之后大鼠心脏功能及室性心律失常改变的差别。本实验采用的主要观察指标有：左室收缩压(left ventricular systolic pressure, LVSP),左室舒张末期压(left ventricular end-diastrolic pressure, LVEDP),左室主动收缩压(left ventricular developed pressure, LVDP=LVSP-LVEDP),心率(heart rate, HR),收缩时心肌最大变化速率(+dp/dtmax),舒张时心肌最大变化速率(-dp/dtmax);室性心律失常包括单发、多发室性期前心律、室速和室颤。结果1.CGRP对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能及室性心律失常的影响。1.1心脏功能a.与对照组比较,心脏停灌注前处理组,CGRP10-7 mol·L-1前处理组可以明显增加HR, LVDP,降低LVEDP (P<0.01),同时有提高LVSP,±dp/dtmax的趋势(P>0.05); CGRP10-6 mol·L-1前处理组可明显降低LVDP, HR,提高LVEDP (P <0.05); CGRP10-8 mol·L-1前处理组可明显降低HR, LVEDP (P<0.01)。与CGRP10-7 mol·L-1前处理组相比,CGRP10-7 mol·L-1 + CGRP8-3710-6 mol·L-1前处理组可明显降低LVSP, HR,同时升高LVEDP (P<0.01),对其他指标也有逆转趋势。b.与对照组比较,心脏停灌注后处理组,CGRP10-7 mol·L-1可明显降低LVSP, LVDP, HR,±dp/dtmax (P<0.01);而与CGRP10-7 mol·L-1后处理组相比,CGRP10-7 mol·L-1 + CGRP8-3710-6 mol·L-1后处理组可明显升高LVSP, LVDP, HR,±dp/dtmax,升高LVEDP (P<0.01).c.与CGRP10-7 mol·L-1前处理组比较,心脏停灌注后处理组,CGRP10-7 mol·L-1后处理组可明显降低LVSP, LVDP, HR,±dp/dtmax,升高LVEDP (P<0.01)。1.2心律失常a.与对照组比较,心脏停灌注前处理组,CGRP10-7 mol·L-1前处理组在再灌后第一个10分钟可明显降低室性心律失常的发生(P<0.01)。CGRP10-6 mol·L-1, CGRP10-8 mol·L-1前处理组没有明显变化。与CGRP10-7 mol·L-1前处理组相比,CGRP10-7 mol·L-1+CGRP8-3710-6 mol·L-1前处理组可明显增高室性心律失常的发生(P<0.01)。b.与对照组比较,心脏停灌注后处理组,CGRP10-7 mol·L-1后处理组有降低再灌后室性心律失常发生的趋势,但差异无统计学意义。而CGRP10-7 mol·L-1+ CGRP8-3710-6 mol·L-1后处理组可以逆转这种趋势。2.OFQ对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能及室性心律失常改变的影响2.1心脏功能a.与对照组比较,心脏停灌注前处理组,OFQ10-6 mol·L-1前处理组可以明显增加LVSP, LVEDP (P<0.05),降低HR(P<0.01); OFQ10-7 mol·L-1前处理组可明显降低+dp/dtmax (P<0.05),提高LVEDP (P<0.01),对其他心功能指标影响无统计学意义。与OFQ10-6 mol·L-1前处理组相比,OFQ10-6 mol·L-1 + UFP10-5 mol·L-1前处理组可明显降低LVSP, LVDP,±dp/dtmax,同时升高LVEDP(P<0.01)。b.与对照组比较,心脏停灌注后处理组,OFQ10-6 mol·L-1后处理组可明显降低LVSP, LVEDP (P<0.05);与OFQ10-6 mol·L-1后处理组相比,OFQ10-6 mol·L-1 + UFP10-5 mol·L-1后处理组可明显升高LVSP, LVDP, LVEDP,-dp/dtmax,降低HR (P<0.01).c.与OFQ10-6 mol·L-1前处理组相比,心脏停灌注后处理组,OFQ10-6 mol·L-1后处理组可明显降低LVSP, LVEDP,升高HR,-dp/dtmax (P< 0.01)。2.2心律失常a.与对照组比较,心脏停灌注前处理组,OFQ10-6 mol·L-1前处理于再灌后第一个10分钟可明显抑制室性心律失常的发生(P<0.01)。OFQ10-7 mol·L-1前处理组没有明显作用。与OFQ10-6 mol·L-1前处理组相比,OFQ10-6 mol·L-1 + UFP10-5 mol·L-1前处理组可明显增高室性心律失常的发生(P<0.01)。b.与对照组比较,心脏停灌注后处理组,OFQ10-6 mol·L-1后处理,对再灌后室性心律失常发生无明显作用。而与OFQ10-6 mol·L-1后处理组相比,OFQ10-6 mol·L-1 + UFP10-5 mol·L-1后处理组也无明显变化。结论：1.预防性给予降钙素基因相关肽(CGRP)对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能有正性变时变力的作用,而再灌后治疗性给予CGRP有负性变时变力的作用。其拮抗剂CGRP8-37能够拮抗上述作用。提示CGRP受体可能参与介导CGRP对心脏功能的调节。而再灌注前后心肌细胞周围环境的不同可能影响CGRP的作用。2.预防性给予孤啡肽(OFQ)对健康大鼠离体心脏缺血再灌注后心脏功能有负性变时正性变力的作用。其拮抗剂UFP-101能够拮抗其正性变力作用。再灌注后治疗性给予OFQ有负性变力的作用,此作用也可被UFP-101拮抗。3.预防性及治疗性给予降钙素基因相关肽(CGRP)均可以减少室性心律失常的发生,其拮抗剂CGRP8-37能够拮抗上述作用。预防性给予孤啡肽(OFQ)可以减少室性心律失常的发生,其拮抗剂CGRP8-37能够拮抗上述作用。机体内源性CGRP和OFQ可能通过其特异性受体参与对再灌后室性心律失常的调节。