论文部分内容阅读
本论文主要探索一种新型的发卡型荧光分子灯塔探针,即碲化镉(CdTe)量子点与淬灭剂(DABCYL等)通过单链DNA相连接。由于CdTe量子点的荧光发射光谱与淬灭剂的吸收光谱相重叠,可以作为供受体对发生荧光共振能量转移作用(FRET)。由于DNA在杂交前后的形态变化促使供受体之间的距离产生变化,从而导致探针的荧光强度改变,因此可用于DNA序列或特定靶DNA的检测。在以巯基乙酸(HS—CH2COOH)为稳定剂的水相中合成了粒径为2.5nm的CdTe量子点是。所合成的量子点具有稳定的、对称的并且较窄的荧光发射带,其半高峰宽(full width at half maximum,FWHM)为24nm。通过改变反应体系pH值与回流时间,得到了制备CdTe量子点的优化条件。根据荧光共振能量转移原理,分别考察了CdTe量子点的荧光发射光谱与淬灭剂的吸收光谱,选择了适当的CdTe量子点作为能量供体与3’端连接有淬灭剂的DNA在PBS缓冲溶液中进行表面修饰,由于CdTe量子点表面的羧基与DNA的5’端的氨基在脱水剂1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚氨盐酸盐(EDC)的作用下发生缩合,因此得到了一种新型的荧光分子灯塔探针。通过对探针的荧光光谱研究表明,分子灯塔探针的荧光强度比纯CdTe量子点低,这表明荧光共振能量体系已经成功被构建。此外,本文通过检测探针与不同目标DNA在杂交反应后荧光强度的变化,考察了这种荧光分子灯塔探针的检测灵敏度与特异性。研究结果表明,探针在与与探针DNA序列完全互补的目标DNA杂交后,其荧光强度得到了最大程度的恢复,这表明荧光供体CdTe量子点与受体淬灭剂之间的距离被拉大,探针的荧光共振能量转移结构被打开,因此荧光强度恢复,其检出限为5.039×10-9mol/L。若采用单碱基错配的目标DNA杂交,则探针的荧光恢复很弱,这表明此探针体系可以检测目标DNA是否发生变异,具有良好的特异性。