粘质沙雷氏菌和噬菌体ΦX174定量检测用标准物质制备技术研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:dingyongguo
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近年来,随着高致病性禽流感、埃博拉病毒、寨卡病毒等新发传染病的不断出现,与其相关的检测和研究工作越来越受到重视,同时人员防护装备性能及其评价也越来越显得尤为重要。因此很有必要研究模拟细菌和模拟病毒的测量方法和计量标准,为我国人员防护装备防护性能的评价、病原微生物生物安全监测提供有力的计量支撑。本试验结果如下:第一章以综述的形式较全面系统地介绍了人员防护装备性能评价的重要性,对本研究所采用的模拟细菌和模拟病毒进行了详细说明,同时对微生物检测方法及其各自特点进行比较和分析。第二章采用超灵敏流式技术进行模拟细菌—粘质沙雷氏菌的测量。通过优化流式细胞仪的参数,测定粘质沙雷氏菌的数量,同时结合平板计数法进行对照实验。实验数据结果显示,两种方法通过拟合直线计算R2为0.9989,具有线性相关性。第三章模拟细菌—粘质沙雷氏菌标准物质,通过在单因素实验的基础上,来确定各因素的冻干保护作用,利用PB法筛选出具有显著的影响因素,再用响应面设计试验对具有显著性因素进行优化,得出最终的冻干保护剂配方。第四章将模拟细菌—枯质沙雷氏菌添加到复合保护剂中,经冻干制备成球状标准物质,通过比较冻干前后活菌数来验证保护剂保护效果,并研究标准物质的均匀性和稳定性。结果表明复合保护剂的保护率达到92.44%,可以在冻干过程中有效保护菌体,制备的粘质沙雷氏菌标准物质均匀性良好,-20℃条件下可以稳定保存半年。第五章通过单因素试验筛选出适合噬菌体ΦX174稳定保存的冻干保护剂,同时在优化冻干工艺基础上,将模拟病毒—噬菌体ΦX174与冻干保护剂混合,经冻干制备成饼状标准物质,采用平板计数法考察复合保护剂对噬菌体ΦX174标准物质冻干粉的保护效率以及均匀性、稳定性。结果显示:复合保护剂对噬菌体ΦX174保护率达到95.44%,可以在冻干过程中有效保护噬菌体。制备的噬菌体ΦX174标准物质,形态好复水速度快,均匀性良好,-20℃条件下可以稳定保存三个月。本文所研制的标准物质可用于食品检测实验室质量控制和食品中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌检测结果的评价。
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