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食管鳞癌(以下简写为“食管癌”)是我国高发且预后较差的常见恶性肿瘤。肿瘤的侵袭转移是食管癌治疗失败和患者死亡的重要原因之一。因此迫切需要深入研究食管癌细胞侵袭运动和肿瘤转移的分子机制,改进食管癌的分型和治疗。在前期工作中,我们发现蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)在食管癌组织中高表达;利用免疫共沉淀(Co-IP)技术,发现PTP1B可与肌球蛋白重链9(myosin heavy chain 9,MYH9)相互作用,使MYH9尾部结构域(Tail Domain,TD;aa 837～1960)Y1408位点去磷酸化,促进转录因子SP1由细胞浆转入细胞核并上调表皮生长因子(epidermal growth factor receptor,EGFR)的表达,促进食管癌细胞的侵袭和迁移。然而PTP1B与MYH9尾部结构域之间是否存在直接的相互作用及MYH9尾部结构域影响的下游作用分子仍不清楚。本研究首先利用MYH9 siRNA,验证MYH9对食管癌细胞侵袭迁移的作用。Transwell实验和细胞划痕实验结果显示,敲降MYH9显著抑制食管癌KYSE510细胞的侵袭迁移和划痕愈合。我们利用KYSE510细胞cDNA扩增获得MYH9尾部结构域的编码序列(CDS)序列,构建Y1408位点突变型(Y1408F和Y1408D)重组质粒p3×FLAG-MYH9(TD)-Y1408(F/D),转化人胚肾细胞293FT细胞表达重组蛋白3×FLAG-MYH9(TD)-Y1408(F/D),通过FLAG标签琼脂糖凝胶亲和纯化获得重组蛋白;利用活性酪氨酸磷酸酶PTP1B与上述重组蛋白,在体外缓冲体系中验证了PTP1B与MYH9存在直接的相互作用。为了深入研究MYH9促进食管癌细胞侵袭迁移的分子机制,我们利用Co-IP及免疫荧光共定位实验验证,发现KYSE510细胞中MYH9与下游转录因子SP1不存在相互作用,提示MYH9 可能通过其它的相互作用分子促进SP1的入核。采用GST pull-down联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选了KYSE510细胞中MYH9尾部结构域的相互作用蛋白。质谱鉴定结果显示,KYSE510细胞中存在72个潜在的与MYH9尾部结构域直接或间接相互作用的蛋白。Gene Ontology(GO)基因功能富集分析结果显示,潜在的相互作用蛋白涉及多种生物学过程,包括JAK-STAT信号通路、细胞粘附调控、NIK/NF-κB信号通路、细胞周期检验点、膜脂筏形成、DNA转录起始、mRNA加工等。通过Co-IP分析对其中的候选分子与MYH9尾部结构域的相互作用进行了初步验证,结果显示PC4和SFRS1结合蛋白1(PC4 and SFRS1 interacting protein 1,PSIP1)和染色质重组蛋白 1(BRG1,由SMARCA4基因编码)与MYH9存在相互作用。综上所述,敲降MYH9可抑制食管癌细胞的侵袭和迁移;MYH9尾部结构域介导多种与细胞运动相关蛋白的相互作用,其中MYH9与PSIP1和BRG1的相互作用已经得到验证。以上结果为阐明MYH9在食管癌侵袭迁移中的作用机制提供了新的线索,为深入研究食管癌的治疗策略提供了候选靶点分子。