铜绿假单胞菌制剂作用小鼠胰腺癌细胞株的体外实验研究

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zyy_2009
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[目的]:观察研究铜绿假单胞菌制剂(PA-MSHA)对体外培养的小鼠胰腺癌细胞株(MPC)抑制生长增殖、诱导凋亡作用,以及对MPC细胞体外迁移、侵袭能力的影响。[方法]:1.测定体外培养的小鼠胰腺癌细胞株(MPC)细胞活力、贴壁率,应用四哇盐比色法(MTT)测定MPC细胞在不同时间、不同浓度的OD值,绘制生长曲线,确定最佳细胞接种浓度及药物干预区间。2.四哇盐比色法(MTT)测定不同时间、不同浓度的铜绿假单胞菌制剂(PA-MSH)对小鼠胰腺癌细胞株(MPC)的生长增殖抑制率并于倒置显微镜观察细胞形态学变化。3.Hoechst33258核染色荧光显微镜观察MPC细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测铜绿假单胞制剂(PA-MSHA)对MPC细胞周期影响的分析以证实凋亡的存在;细胞划痕和侵袭实验检测铜绿假单胞制剂(PA-MSHA)对小鼠胰腺癌细胞株(MPC)迁移、侵袭能力的影响。[结果]:1.小鼠胰腺癌细胞株(MPC)常规培养,存活率均>95%符合本实验要求,MTT测定的生长曲线提示按照6×104/孔的密度接种于96孔板内可提供足够的细胞生长空间及营养成分,使细胞于接种12小时后,适应新环境,逐渐进入快速繁殖期。2.选取细胞接种于96孔板后的48小时左右,该区间能够保证细胞始终处于一个稳定的对数生长期;在此条件下MTT法检测不同浓度PA-MSHA对MPC细胞生长抑制率具有时间和剂量依赖性。3.Hoehest33258染色可见明显的MPC细胞凋亡形态学改变;流式细胞术药物作用组可见典型的亚二倍体峰即凋亡峰(AP),且随浓度增大到2-6×108cfu/ml时G2/M期比例明显增多,提示PA-MSHA可诱导MPC凋亡,使其细胞周期阻滞于G2/M期,抑制细胞增殖;细胞划痕和侵袭实验结果显示PA-MSHA能够明显降低MPC细胞的迁移、侵袭能力。[结论]:本实验示:1.不同浓度铜绿假单胞菌制剂(PA-MSHA)作用不同时间对鼠胰腺癌细胞(MPC)增殖具有明显的抑制作用,呈时-效和量-效依赖关系,具有时间、剂量依赖性。2.铜绿假单胞菌制剂(PA-MSHA)毙诱导小鼠胰腺癌细胞株(MPC)凋亡。3. PA-MSHA能够明显降低MPC细胞的迁移、侵袭能力。4.铜绿假单菌胞菌制剂(PA-MSHA)可能是有前景的抑制胰腺癌细胞的药物。
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