背景及目的:　　 肿瘤微环境(tumor micrenvironment TME)影响着肿瘤细胞的增殖,分化,组织特异性转移,免疫逃逸及抗药性的形成。在肿瘤微环境中,血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)发挥着关键性的作用,不仅为肿瘤的生长提供营养,也是免疫反应的调节者和效应者。在肿瘤的血行转移过程中,肿瘤细胞和微血管的相互作用是肿瘤转移的限速步骤。肿瘤微环境包括多个生理区域,具有多层次的作用帮助肿瘤的扩散和转移,但迄今为止相关机制尚不完全清楚。为了研究不同类型肿瘤微环境,以及随着肿瘤微环境作用时间的增长和作用的增强而对血管内皮细胞的膜表面分子表达量的影响。本实验采用脐静脉内皮细胞体外培养和实时荧光定量PCR的方法,研究肿瘤微环境对血管内皮细胞的粘附能力相关分子(VCAM-1、ICAM-1、CD29、CD31、CD62E),抗原提呈能力相关分子(MHC-Ⅱ、CDS0、CD86、CD40)表达的影响。　　 方法:　　 1、人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)的分离培养和鉴定:0.25％胰蛋白酶在37℃下消化15-20min获得HUVEC,常规培养,利用免疫组织化学测定HUVECⅧ因子相关抗原的表达;　　 2、不同类型肿瘤细胞培养上清对HUVEC膜标志的影响:将HUVEC传代培养至第3代时,分别加入50%SGC7901细胞培养上清和50%SMMC7721培养上清,诱导48h,并与之与对照组相比较。利用荧光定量PCR法测定其VCAM-1、ICAM-1、CD29、CD31、CD62E、MHC-Ⅱ、CD80、CD86、CD40的CT值。采用2-△△C1法计算得到相对基因表达量;　　 3、肿瘤上清不同作用时间对HUVEC膜标志的影响:50%SMMC7721细胞培养上清分别诱导HUVEC0h,24h,48h,72h,荧光定量PCR法检测膜标志的CT值;　　 4、不同浓度肿瘤上清对HUVEC膜标志的影响:0%,50%,70%,100%SMMC7721细胞培养上清诱导48h。荧光定量PCR法检测膜标志的CT值。　　 结果:　　 1、HUVEC的分离培养和鉴定:培养第2d即可观察到HUVEC贴壁,呈铺路石样排列。组化结果显示:胞浆内可见棕色颗粒,Ⅷ因子染色阳性。　　 2、不同类型肿瘤微环境对HUVEC膜标志的影响:50%SMMC7721培养上清,诱导48h后VCAM-1,CD31,CD29,CD86表达低于正常值,而CD62E,CD80表达高于正常;50%SGC7901细胞培养上清,诱导48h后,ICAM-1,CD31表达低于正常值,CD62E,CD80表达高于正常值。　　 3、肿瘤上清不同作用时间对HUVEC膜标志的影响:50%7721培养上清,诱导24h后,CD86,CD40表达低于正常值,ICAM-1表达高于正常值;50%SMMC7721培养上清,诱导48h后,VCAM-1,CD31,CD29,CD86表达低于正常值,而CD62E,CD80表达高于正常:50%SMMC7721培养上清,诱导72h后,CD86,HLA-DR,VCAM-1,CD31表达低于正常值,而CD80表达高于正常值。　　 4、不同浓度肿瘤上清对HUVEC膜标志的影响:50%SMMC7721培养上清,诱导48h后,VCAM-1,CD31,CD29,CD86表达低于正常值,而CD62E,CD80表达高于正常;70%SMMC7721培养上清,诱导48h后,CD40,HLA-DR,VCAM-1,ICAM-1,CD31表达低于正常值,而CD80,CD62E表达高于正常值;100%SMMC7721培养上清,诱导48h后ICAM-1,CD31,HLA-DR表达低于正常值,CD62E,CD80表达高于正常值。　　 结论:　　 SMMC7721和SGC7901肿瘤细胞培养上清可影响HUVEC VCAM-1、ICAM-1、CD31、CD80、CD86、HLA-DR,CD29,CD40,CD62E的mRNA的表达,其影响程度与肿瘤类型、作用浓度和时间相关。说明肿瘤微环境可能通过血管内皮细胞膜分子表达的变化影响淋巴细胞的浸润和活化,及其抗原提呈能力。