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G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCRs）是人类基因组上具有七次跨膜结构的膜蛋白受体超家族之一,在信号通路传导中发挥着重要的作用。由于其与配体结合具有高度的特异性,GPCRs在药物研发中占有很大的优势。GPR50是位于X染色体Xq28上的孤儿GPCR。研究表明,GPR50可能在脂代谢、能量代谢和乳腺癌中发挥重要作用。然而,其对肝脏的调节作用及机制研究甚少。考虑到GPCR在药物筛选中的优势,研究GPR50在肝脏细胞中的作用及机制,对肝脏疾病的药物研发有重要的参考意义。因此,本课题拟从体外水平探究GPR50对肝（癌）细胞中的调节作用及机制。首先,为了解GPR50在肝（癌）细胞中的生物学作用,本文以大鼠正常肝细胞株BRL-3A和肝癌细胞株CBRH-7919为实验材料,用qRT-PCR、Western Blot和免疫荧光等方法检测了GPR50在两种细胞中的表达情况,发现其在CBRH-7919细胞中表达显著高于BRL-3A细胞,推测GPR50可能在肝癌中起重要作用。接下来,我们通过基因添加或干涉的方法,干扰内源性GPR50的表达。结果发现,siRNA干扰效果不佳,可能是由于GPR50在两种细胞中的本底含量太低造成的;幸运的是,我们通过慢病毒介导的方法成功获得GPR50过表达的稳转株。进而采用MTT、EdU、流式细胞术、软琼脂、划痕实验和MDC染色等技术检测GPR50对两种细胞活力、增殖、周期、迁移和自噬的影响。结果表明,过表达GPR50抑制BRL-3A细胞增殖,促进CBRH-7919细胞增殖及迁移;同时,促进两种细胞自噬。为进一步探究GPR50调控BRL-3A细胞增殖的分子机理,iTRAQTM检测发现,GPR50过表达组（3A-GPR50）与对照组（3A-PCDH）中,50种蛋白的表达存在显著性差异。其中,21种蛋白表达上调和29种表达下调。GO和KEGG富集分析发现,上述蛋白主要参与生物学调控、应激反应、细胞增殖、物质代谢等生理活动及PI3K/Akt、细胞周期等信号通路。与细胞增殖相关的12种蛋白,主要参与细胞增殖调控、细胞周期调控、G1/S期转化等生理活动和PI3K/Akt信号通路;通过查阅文献,结合差异蛋白质组学分析结果,我们推测GPR50可能与TβR1形成异源二聚体,激活Smad3,通过上调p27/p21的表达,抑制CDK2/CCNE和CDK4/6/CCND1的活性,导致G1/S期细胞周期生长停滞,从而抑制BRL-3A细胞的增殖。首先,我们用免疫共沉淀法结合免疫荧光法验证了GPR50与TβRI的互作关系;Western Blot检测TGF-β信号通路及G1/S期相关蛋白表达情况发现,结果与我们的预期相符。我们还进一步通过添加TGF-β信号途径抑制剂验证了上述结果。