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【研究目的】了解云南省恶性疟原虫分离株PfKelch13基因多态及其分子流行病学特征;对恶性疟原虫分离株的PfKelch13基因突变与青蒿素耐药性间的关联程度进行间接评估,为云南省恶性疟原虫青蒿素耐药性分子监测标志提供进一步的理论依据。【研究方法】(1)收集2013年1月-2015年12月,经确诊的云南省恶性疟疾报告病例血样202份,2009年1月-2012年12月经确诊的缅甸籍恶性疟疾病例血样384份;青蒿琥酯耐药性体内受试对象为:年龄2~60岁、2周内无抗菌药服药史或/和抗疟药史的缅甸籍恶性疟疾病例,接受青蒿琥酯耐药性体内测试。(2)参照QIAamp DNA Mini Kit疟原虫DNA提取试剂盒说明书,提取疟原虫基因组DNA,巢氏PCR扩增PfKelch13基因kelch结构域,对测序基因片段的单倍型及期望杂合度(He)、基因多态系数(H)和群体间遗传分化指数(Fst)进行分析;构建PfKelch13基因kelch结构域单倍型中介网络图,对云南省及缅甸籍病例恶性疟原虫分离株类群间的遗传背景进行分析。(3)统计学方法分析恶性疟原虫分离株PfKelch13基因kelch结构域突变型与青蒿素治疗失败之间的关联性。(4)参照QIAamp DNA Mini Kit疟原虫DNA提取试剂盒说明书提取疟原虫基因组DNA,PCR扩增Pfhrp2基因的exon2区,并进一步对PCR扩增出的阳性产物进行测序;对测序基因片段的单倍型及期望杂合度(He)、基因多态系数(H)和群体间遗传分化指数(Fst)进行分析,构建Pfhrp2基因exon2区单倍型中介网络图,对云南省及缅甸籍恶性疟原虫分离株Pfhrp2基因exon2区类群间的遗传背景进行分析。【结果】(1)本研究中云南省疟疾报告病例PfKelch13基因kelech结构域DNA序列中,单倍型共有13种,He为0.0481,错义突变序列占34.7%(66/190),在16、446和676等10个位点发生单位点突变,F446I的突变率最高,为25.3%(48/190);缅甸籍病例PfKelch13基因kelech结构域DNA序列中,单倍型共有19种,He为0.0440,错义突变序列占58.8%(114/194),在446、76和492等12个位点发生单位点突变,F446I的突变率最高,为43.3%(84/194)。(2)本研究中云南及缅甸籍病例PfKelch13基因kelech结构域的遗传分化指数Fst=0.0410(P<0.05),群体内、群体间的变异分别占95.90%和4.10%,且各类群内的单倍型中介网络图均显示“星状”布局。(3)研究中,以缅甸籍病例推算的青蒿素耐药性与PfKelch13基因kelech结构域446位点突变的OR值为1.640(95%CI:1.284~2.095)、与PfKelch13基因kelech结构域12种位点突变的OR值为1.840(95%CI:1.412~2.398)。(4)本研究中云南疟疾报告病例与缅甸籍病例Pfhrp2基因exon2区的遗传分化指数Fst=0.0047(P<0.05),两类群间遗传变异微弱、几乎无分化,且两类群内的单倍型中介网络图并未显示出明显的地理域聚类分支。【结论】(1)云南省疟疾报告病例与缅甸籍病例恶性疟原虫PfKelch13基因kelch结构域具有多态性。(2)云南省疟疾报告病例与缅甸籍病例的恶性疟原虫分离株类群在PfKelch13基因kelch结构域上的分化程度低,具有相似的遗传背景。(3)以缅甸籍病例推算的青蒿素耐药性产生与PfKelch13基因kelech结构域446位点突变的OR值为1.640(95%CI:1.284~2.095)、与12种位点突变的OR值为1.840(95%CI:1.412~2.398),以缅甸籍病例分离株推算出的PfKelch13基因突变与青蒿素耐药性产生的遗传关联程度适用于云南报告病例的恶性疟原虫类群。(4)云南省疟疾报告病例与缅甸籍病例的恶性疟原虫分离株类群在Pfhrp2基因exon2区的分化程度低,具有相似的遗传背景。