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第—部分抗热休克转录因子1抗体作为特发性炎性肌病新型血清学标志物的研究
目的:肌炎自身抗体对特发性炎性肌病(idiopathicinflammatorymyopathy，ⅡM)的诊断、分型和预后具有重要的临床价值。本研究旨在应用人类蛋白质组芯片技术筛选ⅡM的新型抗体，并在大样本的ⅡM患者中明确新型抗体的分布特点及临床意义。
方法:研究采用人类蛋白质组芯片技术筛选ⅡM中的未知抗体。联合应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELI SA)、免疫印迹(immunoblot，IB)和斑点印迹(dot blot，DB)检测ⅡM患者、疾病及健康对照(healthy controls，HCs)血清中的抗HSF1抗体。并进一步应用免疫荧光检测了HSF1在ⅡM患者肌肉组织中的表达情况。
结果:本研究采用人类蛋白质组芯片筛选发现抗热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1，HSF1)抗体是存在于ⅡM的一种新型抗体。并进一步联合应用ELISA、IB和DB证实了抗HSF1抗体的存在。抗HSF1抗体可见于11.0％(64/581)ⅡM、10.8％(4/37)类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)、12.5％(5/40)原发性干燥综合征(primary Sj(o)grens syndrome，pSS)、5％(2/40)系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者和3.1％(2/65)的HCs。抗HSF1抗体阳性ⅡM患者常伴皮肤瘙痒、高球蛋白血症及血沉升高。ⅡM亚组分析发现，抗HSF1抗体常见于肿瘤相关性肌炎(cancer-associated myositis，CAM)患者(CAMvs.non-CAM，17.2％vs.7.5％;P=0.009)。但在单纯肿瘤患者中并未检测到抗HSF1抗体的存在。同时，横断面及随访研究均发现non-CAM患者的血清抗HSF1抗体水平与其疾病活动度呈正相关。此外，ⅡM肌组织的再生肌细胞中可见抗HSF1抗体靶抗原的高表达。
结论:抗HSF1抗体是一种新型ⅡM自身抗体，并可作为ⅡM亚型-CAM的血清学标志物。ⅡM再生肌细胞中高表达的HSF1可能诱发抗HSF1/HSF1自身免疫的发生，参与ⅡM的免疫发病过程。
第二部分热休克转录因子1在成肌细胞分化过程中作用的初步探讨
目的:我们上述的研究证明特发性炎性肌病(idiopathicinflammatorymyopathy，ⅡM)患者的外周血中存在抗热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1，HSFI)抗体，并在ⅡM肌肉组织的再生肌细胞中检测到了HSF1的高表达。本研究的目的是进一步明确HSF1在骨骼肌细胞再生过程中的表达变化，并探讨其在肌细胞分化中的生理作用。
方法:采用免疫荧光技术检测ⅡM受累肌肉组织再生肌细胞中HSF1的表达特点。用C2C12细胞和原代人骨骼肌CD56+细胞体外诱导分化实验观察肌细胞分化过程中HSF1的表达变化。应用westemblot实验对肌细胞分化过程中HSF1的表达水平进行半定量分析。此外，通过RNA干扰技术观察HSF1表达的改变对肌细胞分化的影响。
结果:ⅡM受累肌组织的再生肌细胞胞浆中可见HSF1高表达，而在正常肌纤维中则未见HSF1的表达。C2C12细胞和原代入骨骼肌CD56+细胞体外诱导分化实验发现，HSF1阳性细胞比例随细胞诱导分化时间延长而逐渐增加。HSFI在分化的肌细胞胞浆中可见不均匀性的表达分布，而在增殖的肌细胞中却未见表达。Westernblot实验半定量分析C2C12诱导分化过程中HSF1的表达水平，发现HSF1在肌细胞早期分化阶段的表达最为显著。此外，干扰C2C12细胞分化过程中HSF1的表达会导致myogenin的表达减低。
结论:HSF1在肌再生过程中可见高表达，且HSF1是肌细胞分化的关键调控因子。明确肌肉再生中HSF1的生理学作用对探索ⅡM肌无力的潜在治疗靶点具有重要意义。
目的:肌炎自身抗体对特发性炎性肌病(idiopathicinflammatorymyopathy，ⅡM)的诊断、分型和预后具有重要的临床价值。本研究旨在应用人类蛋白质组芯片技术筛选ⅡM的新型抗体，并在大样本的ⅡM患者中明确新型抗体的分布特点及临床意义。
方法:研究采用人类蛋白质组芯片技术筛选ⅡM中的未知抗体。联合应用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELI SA)、免疫印迹(immunoblot，IB)和斑点印迹(dot blot，DB)检测ⅡM患者、疾病及健康对照(healthy controls，HCs)血清中的抗HSF1抗体。并进一步应用免疫荧光检测了HSF1在ⅡM患者肌肉组织中的表达情况。
结果:本研究采用人类蛋白质组芯片筛选发现抗热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1，HSF1)抗体是存在于ⅡM的一种新型抗体。并进一步联合应用ELISA、IB和DB证实了抗HSF1抗体的存在。抗HSF1抗体可见于11.0％(64/581)ⅡM、10.8％(4/37)类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)、12.5％(5/40)原发性干燥综合征(primary Sj(o)grens syndrome，pSS)、5％(2/40)系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)患者和3.1％(2/65)的HCs。抗HSF1抗体阳性ⅡM患者常伴皮肤瘙痒、高球蛋白血症及血沉升高。ⅡM亚组分析发现，抗HSF1抗体常见于肿瘤相关性肌炎(cancer-associated myositis，CAM)患者(CAMvs.non-CAM，17.2％vs.7.5％;P=0.009)。但在单纯肿瘤患者中并未检测到抗HSF1抗体的存在。同时，横断面及随访研究均发现non-CAM患者的血清抗HSF1抗体水平与其疾病活动度呈正相关。此外，ⅡM肌组织的再生肌细胞中可见抗HSF1抗体靶抗原的高表达。
结论:抗HSF1抗体是一种新型ⅡM自身抗体，并可作为ⅡM亚型-CAM的血清学标志物。ⅡM再生肌细胞中高表达的HSF1可能诱发抗HSF1/HSF1自身免疫的发生，参与ⅡM的免疫发病过程。
第二部分热休克转录因子1在成肌细胞分化过程中作用的初步探讨
目的:我们上述的研究证明特发性炎性肌病(idiopathicinflammatorymyopathy，ⅡM)患者的外周血中存在抗热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1，HSFI)抗体，并在ⅡM肌肉组织的再生肌细胞中检测到了HSF1的高表达。本研究的目的是进一步明确HSF1在骨骼肌细胞再生过程中的表达变化，并探讨其在肌细胞分化中的生理作用。
方法:采用免疫荧光技术检测ⅡM受累肌肉组织再生肌细胞中HSF1的表达特点。用C2C12细胞和原代人骨骼肌CD56+细胞体外诱导分化实验观察肌细胞分化过程中HSF1的表达变化。应用westemblot实验对肌细胞分化过程中HSF1的表达水平进行半定量分析。此外，通过RNA干扰技术观察HSF1表达的改变对肌细胞分化的影响。
结果:ⅡM受累肌组织的再生肌细胞胞浆中可见HSF1高表达，而在正常肌纤维中则未见HSF1的表达。C2C12细胞和原代入骨骼肌CD56+细胞体外诱导分化实验发现，HSF1阳性细胞比例随细胞诱导分化时间延长而逐渐增加。HSFI在分化的肌细胞胞浆中可见不均匀性的表达分布，而在增殖的肌细胞中却未见表达。Westernblot实验半定量分析C2C12诱导分化过程中HSF1的表达水平，发现HSF1在肌细胞早期分化阶段的表达最为显著。此外，干扰C2C12细胞分化过程中HSF1的表达会导致myogenin的表达减低。
结论:HSF1在肌再生过程中可见高表达，且HSF1是肌细胞分化的关键调控因子。明确肌肉再生中HSF1的生理学作用对探索ⅡM肌无力的潜在治疗靶点具有重要意义。