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目的1.在强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis,AS)患者与健康对照中检测干扰素调节因子8(Interferon regulatory factor8,IRF8)基因启动子的甲基化及其m RNA的表达水平。2.探讨IRF8基因启动子的甲基化与AS临床特征之间是否具有相关性,探索IRF8基因启动子的甲基化与疾病预后之间的关系。方法1.2016年到2019年,本研究收集病例与对照的5ml血液样本及流行病学资料。病例与对照的收集一共分为两个部分,第一部分,我们比较了99例AS患者和99例健康对照之间IRF8基因启动子的甲基化水平。第二部分,我们比较了另外19个AS患者和19个健康对照之间IRF8基因的m RNA表达水平。根据药物治疗情况分为非生物制剂组和生物制剂组。非生物制剂组是指使用缓解病情风湿药,非甾体抗炎药和糖皮质激素类药物的患者。生物制剂组是指使用肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)抑制剂的患者。2.首先对收集到的样本进行DNA的提取,并且进行IRF8基因启动子的甲基化和m RNA表达水平的检测,本次实验检测方法分别采用DNA试剂盒、Methyl Target方法和定量实时逆转录聚合酶链反应(Quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction,q RT-PCR)方法。3.使用SPSS23.0软件进行统计分析并且根据不同的数据性质及分布类型采用不同的统计分析方法。符合正态分布的定量资料用均数±标准差进行描述,呈现偏态分布的定量资料采用中位数和四分位数间距(Interquartile range,IQR)进行描述;而对于定性资料的分布特征采用频数及百分比来进行描述。统计方法的选择如下:满足正态分布的定量资料采用t检验进行两组间的比较,不满足正态分布的定量资料则采用Mann-Whitney U检验进行病例和对照间该资料的比较;而关于定性资料在两组间的比较则采用卡方检验进行分析;采用Spearman相关性进行双变量的相关分析。由于性别、药物治疗和HLA-B27状态可能会影响基因的甲基化水平,所以在进行统计分析同时按照性别,治疗和HLA-B27状态进行了分层;使用Kruskal Wallis Test检验比较多组之间是否有统计学差异,多组之间的两两比较采用Mann-Whitney U检验。Graph Pad Prism版本7(Graph Pad Software,La Jolla,CA USA)进行图形的绘制。P值≤0.05被认为具有统计学意义。多重比较时采用Bonferroni校正。结果1.一般情况的概述:本次研究分为两个部分。第一部分,研究共纳入了99个AS患者和99个健康对照。AS患者的平均年龄为31.14±9.93岁,男女性别比为3.5:1。健康对照的平均年龄为31.77±8.69岁,男女性别比为5.18:1。AS患者和健康对照在年龄分布(t=0.475,P=0.635)和性别(χ2=0.861,P=0.353)上无统计学差异。第二部分共纳入19名AS患者和19名健康对照。两组之间的性别和年龄没有显着差异(年龄:32.21±7.58 vs.32.05±7.75岁,P=0.950;男/女:13/6 vs.14/5,P=0.721)。2.91个Cp G位点的甲基化水平与AS易感性的关联分析:研究共选择了91个Cp G位点,差异性甲基化分析发现了31个差异表达的Cp G位点,这表明AS患者的IRF8基因有显著的DNA甲基化水平的变化。3.IRF8基因的四个Cp G区域总体甲基化水平:Cp G-1的甲基化水平在AS患者中的中位百分数是1.53%,在健康对照中中位百分数是1.40%;Cp G-2的甲基化水平在AS患者中的中位百分数是3.43%,在健康对照中的中位百分数是3.20%;Cp G-3的甲基化水平在AS患者中的中位百分数是1.23%,在健康对照中中位百分数是1.17%;Cp G-4的甲基化水平在AS患者中的中位百分数是1.40%,在健康对照中中位百分数是1.35%;IRF8基因启动子的4个Cp G区域的甲基化状态在AS患者中均显著高于健康对照(Cp G-1:1.53%vs.1.40%,P<0.001;Cp G-2:3.43%vs.3.20%,P<0.001;Cp G-3:1.23%vs.1.16%,P<0.001;Cp G-4:1.40%vs.1.34%,P=0.02)。就总体水平来说,AS患者中IRF8基因的总体甲基化水平显著高于健康对照组(IRF8:1.91%vs.1.78%,P<0.001)。4.IRF8甲基化水平的亚组分析:性别的分层分析结果显示,无论是男性还是女性分组,DNA甲基化差异在AS和健康对照中均具有统计学意义。药物的分层分析结果显示,IRF8甲基化水平在未用药与生物制剂组之间的差异具有统计学意义(Z=-2.502,P=0.012)。而IRF8甲基化水平在未用药与非生物制剂组(Z=-1.425,P=0.154)和非生物制剂组与生物制剂组(Z=-1.185,P=0.236)均无统计学意义。HLA-B27的分层分析结果显示,无论是HLA-B27阳性组还是HLAB27阴性组中,IRF8的甲基化水平均高于健康对照组,而且HLA-B27阳性组与HLA-B27阴性组相比,IRF8的甲基化水平的差异不具有统计学意义。5.q RT-PCR验证:AS患者中IRF8基因的m RNA表达水平显着低于健康对照组。AS患者中IRF8基因的m RNA水平的中位数和四分位间距是0.77(0.65,1.00),P=0.038。6.IRF8基因甲基化与临床表现的相关性:相关分析发现IRF8基因启动子甲基化与病程和BASFI之间存在正向相关性。结论1.IRF8基因启动子的高甲基化通过降低其m RNA的表达可能会导致AS的发生。2.生物制剂治疗可能会改变IRF8基因启动子的甲基化水平,HLA-B27的状态与IRF8基因启动子的甲基化水平无关。3.IRF8基因启动子甲基化水平可以作为判断AS疾病预后的指标。