【摘 要】
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用野生型发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogens)A4菌株感染黄瓜(CucumissativasL.)无菌苗的子叶和下胚轴,建立了黄瓜的发根遗传转化体系.由于进退声波处理可在外植体上许多微小
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用野生型发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogens)A4菌株感染黄瓜(CucumissativasL.)无菌苗的子叶和下胚轴,建立了黄瓜的发根遗传转化体系.由于进退声波处理可在外植体上许多微小伤口,从而促进农杆菌与外植体之间的接触面积,提高农杆菌对植体的转化频率.我们用超声波辅助农杆菌转化的同时,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的活添加与否影响因素进行了优化研究,结果表明,采用外植体在添加0.5mg/LNAA和2mg/L6-BA的MS培养基上预培养4天,超声波处理2秒,共培养3天,在预培养和共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果,发根诱导率为94.7﹪.但乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显.冠瘿碱检测表明,发根确定能合成农杆碱.培养基中添加生长激素诱导黄瓜愈伤组织分化再生.经选择,最适合的培养基为0.5mg/LNAA+2mg/L6-BA.根癌农杆菌EHA105感染黄瓜的子叶和下胚轴后,在Kan抗性筛选培养基上筛选得到转化的黄瓜.GUS染色表明转化器官具有极强的β-葡糖苷酸活性.根据癌农杆菌LBA4404转化黄瓜和番茄.黄瓜最终得到了9株活转化株,番茄转化率较高,外别和兰优早红转化率分别为15﹪和10﹪,从中可以看出不同类型和同一类的不同基因型对转化频率有重要影响.
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