论文部分内容阅读
杜氏藻(Dunaliella sp.)是一种单细胞嗜盐藻类,广泛的分布于海洋、盐湖中,是已报道耐盐性最强的真核光合生物之一。在逆境中,杜氏藻有较强的β-胡萝卜素合成能力,其含量可达干重的14%,是一种生产p-胡萝卜素的天然资源。p-胡萝卜素是维生素A的前体,具有抗氧化,抗肿瘤,增强免疫、防治心血管疾病、抗辐射和光敏损伤等的功能,同时可以作为无毒无害的食品添加剂及色素,在促进动物生长及繁殖方面也发挥了举足轻重的作用。因此开展杜氏藻的人工养殖方法的研究,对于大规模繁殖杜氏藻和生产p-胡萝卜素具有深远意义。本实验采用单因素、正交实验以及向培养基中添加外源物质的方法对采自运城盐湖杜氏藻品系培养条件进行优化,通过相关理化指标的测定,确定最佳的培养条件,实验结果如下:1、采用单因素和正交实验方法,研究了温度、NaCl浓度和氮、磷、铁元素对其细胞增殖和p-胡萝卜素积累的影响。结果显示杜氏藻的细胞密度及其β-胡萝卜素含量分别与A654nm和A453nm之间存在良好的线性关系,利用吸光值表征杜氏藻细胞密度和p-胡萝卜素含量步骤简单,便于操作。杜氏藻在20~25℃,1.0~2.0mol/L Na Cl时,有利于细胞增殖和β-胡萝卜素积累。藻细胞生长至对数期后,N、P、Fe元素浓度升高,不利于藻细胞的增殖;N、P元素浓度的升高,不利于藻细胞积累β-胡萝卜素;Fe元素浓度在实验期间,对藻细胞积累β-胡萝卜素无显著影响。进一步优化,培养基中有利于藻细胞增殖的NaNO3、NaH2PO4·2H2O、FeC6H5O7浓度最优组合为0.2200g/L0.0256g/L 和 0.0010g/L。培养基中有利于β-胡萝卜素积累的NaNO3、NaH2PO4·2H2OFeC6H507浓度浓度最优组合为0.62OOg/L,0.0256g/L和0.0010g/L。本实验优化出杜氏藻生长及积累p-胡萝卜素的最佳培养基组分含量,为今后当地开发利用高产β-胡萝卜素藻株奠定了理论基础。2、通过对培养基中添加不同浓度的葡萄糖氧化酶及细胞色素C,研究了其对杜氏藻细胞密度及p-胡萝卜素含量的影响。结果表明:通过初步优化和精细优化,葡萄糖氧化酶浓度为10mg/L时,细胞密度最低,而浓度为9mg/L时,细胞密度最大,各浓度之间无显著性差异;葡萄糖氧化酶浓度为9mg/L时杜氏藻积累β-胡萝卜素最多且显著性明显。在葡萄糖氧化酶实验的基础上做了细胞色素C影响实验,通过研究不同浓度的细胞色素C对杜氏藻β-胡萝卜素的影响,细胞色素C为2μmol/L时,细胞密度达到最大值,且具显著性差异;细胞色素C浓度为1μmol/L时杜氏藻积累β-胡萝卜素最多且显著性明显。