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目的:探讨肿瘤组织和正常组织中par-4 (prostate apoptosis response-4) 蛋白与hTERT蛋白表达和端粒酶活性表达的相关关系,以及检测正、反义par-4基因转染不同体外培养的肿瘤细胞的生物学特性、par-4基因表达、hTERT蛋白和端粒酶活性,探讨par-4蛋白影响端粒酶活性的可能机制,为进一步深入研究端粒酶活性调控提供线索。方法:1. 收集肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、直肠癌组织标本共46例,以及每一癌组织标本中相应正常组织共46例。分别用免疫组化染色法、western blot法、RT-PCR法检测所有组织中par-4基因的表达情况,同时用上述各种方法检测癌组织中hTERT的表达情况,用PCR-ELISA法检测癌组织的端粒酶活性,并且运用统计学分析表达与hTERT表达和端粒酶活性的相关关系。2. 应用分子克隆技术,构建par-4基因正义真核表达载体和par-4基因反义表达载体。用脂质体介导转染法将par-4基因正义、反义基因真核表达载体(pClneo-par-4, pcDNA3.1(-)-par-4)和两种空质粒载体(pc1-neo、pcDNA3.1(-))分别转入体外培养的胃癌细胞株SGC7901,肺腺癌细胞株A549,结肠癌细胞株HCT-116细胞和肝癌细胞HepG-2中,用G418筛选阳性转染细胞克隆后,对转染前后各株细胞的生物学特性、生长曲线进行观察,用免疫组化染色法、western blot定量检测法、RT-PCR半定量检测法以及PCR-ELISA法对各株细胞的par-4表达、hTERT表达、端粒酶活性进行定性、定量检测,统计学分析以上各检测指标的相关关系。结果:1. par-4蛋白广泛表达于肺、胃、肝、结肠、直肠等组织中,在肿瘤组织中也是普遍表达的,但是在肿瘤组织中,表达水平与相应的正常组织相比明显降低,有显著性差异。2. 在正常组织中,par-4主要表达于腺体细胞中、血管上皮细胞和成纤维细胞中。在细胞中的分布主要表达于胞浆,可以见到在少数胞核中有表达,但仍以胞浆表达国家自然科学基金资助(No:30271442)<WP=9>占多数。3. hTERT表达与端粒酶活性在癌组织和体外培养细胞中均表现出一致性。4. 成功构建了par-4基因的正义和反义基因真核表达载体pClneo-par-4和pcDNA3.1(-)-par-4。5.将正、反义par-4真核表达载体转染入肺腺癌细胞株A549,胃癌细胞株SGC-7901,肝癌细胞HepG-2和结肠癌细胞株HCT-116细胞等4种体外肿瘤细胞中,且有效表达,pClneo-par-4转染细胞中par-4 mRNA和蛋白表达水平均升高,平均到达2-3倍,反义表达载体pcDNA3.1(-)-par-4转染的细胞中,par-4 mRNA和蛋白表达水平均降低,降低到原来的20%～30%,反义基因的封闭效果达70%～80%。6. 经G418筛选获得的阳性克隆中,稳定转染正义表达载体pClneo-par-4的形态和生长速度没有明显的改变;而稳定转染反义表达载体pcDNA3.1(-)-par-4的细胞A549、HepG2、HCT-116出现生长速度减慢。7. par-4蛋白表达与hTERT表达和端粒酶活性未见明确相关性。结论:1. par-4蛋白在正常组织中广泛表达,在癌组织中表达有明显减低,与正常组织相比,有显著性差异,par-4表达降低与肿瘤是密切相关的。2. 成功构建了par-4基因的正义和反义真核表达载体pClneo-par-4和pcDNA3.1(-)-par-4,成功的将外源性基因转染到体外培养的肿瘤细胞,并有效表达,增加或减少par-4蛋白的表达。3. par-4蛋白的表达与hTERT的表达和端粒酶的活性没有明确的相关性。